【摘 要】
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目的 观察谷氨酰胺酶1(GLS1)在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达情况,及抑制GLS1表达对肿瘤细胞生物学特性的影响.方法 采用蛋白质印迹法检测GLS1在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达;按转染小干扰RNA(siRNA)情况,将人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞株BON-1分为对照组、空白siRNA组与GLS1-siRNA组,蛋白质印迹法检测转染后GLS1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况,Tra
【机 构】
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安阳市人民医院普外科,河南安阳455000;安阳市人民医院病理科,河南安阳455000;郑州大学基础医学院,河南郑州450000
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目的 观察谷氨酰胺酶1(GLS1)在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达情况,及抑制GLS1表达对肿瘤细胞生物学特性的影响.方法 采用蛋白质印迹法检测GLS1在胃肠道神经内分泌肿瘤中的表达;按转染小干扰RNA(siRNA)情况,将人胃肠道神经内分泌肿瘤细胞株BON-1分为对照组、空白siRNA组与GLS1-siRNA组,蛋白质印迹法检测转染后GLS1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及磷酸化mTOR(p-mTOR)蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况,Transwell小室检测细胞侵袭力;再加入10 nmol mTOR抑制剂雷帕霉素后,检测细胞增殖侵袭力的改变.结果 GSL1在胃肠道神经内分泌肿瘤组织中表达量高于癌旁组织,t=5.992,P＜0.001.肿瘤组织中MMP-2、MMP-9和p-mTOR蛋白表达量高于癌旁组织,差异均有统计学意义,(t=4.645,P＜0.001;t=5.523,P＜0.001;t=6.953,P＜0.001);mTOR在肿瘤组织中表达水平亦高于癌旁组织,但差异无统计学意义,t=1.740,P=0.082.siRNA转染后,GSL1-siRNA组细胞12、24和36 h时细胞增殖明显受抑制,其细胞增殖率低于对照组以及空白组(F=6.160,P＜0.040;F=97.650,P＜0.001;F=173.100,P＜0.001);GSL1-siRNA组细胞侵袭数低于对照组及空白组,F=7.970,P=0.020.抑制GSL1表达后,MMP-2、MMP-9和p-mTOR蛋白表达较对照组以及空白siRNA组降低(F=91.500,P＜0.001;F=21.930,P＜0.001;F=5.570,P=0.040),但mTOR蛋白水平组间比较差异无统计学意义(F=1.810,P=0.191).雷帕霉素处理后,抑制剂组细胞在12和24 h时增殖率低于对照组(t=5.567,P＜0.001;t=15.648,P＜0.001);细胞侵袭数也明显低于对照组,t=3.060,P=0.030.雷帕霉素抑制使细胞MMP-2、MMP-9和p-mTOR蛋白水平明显降低(t=2.884,P=0.047;t=3.813,P=0.014;t=9.471,P=0.001),而mTOR蛋白减少不明显(t=0.816,P=0.475).结论 GSL1在人胃肠道神经内分泌肿瘤中呈高表达,抑制GSL1表达能使BON-1细胞的增殖和侵袭能力明显受限,其机制可能与mTOR信号通路抑制有关.
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