探讨Notch1减轻心肌缺血再灌注损伤作用的分子机制。
方法采用Notch1胞内结构域(N1ICD)慢病毒表达载体(Lv－N1ICD)及N1ICD慢病毒干扰载体(Lv－N1ICD－shRNA)分别感染H9c2心肌细胞，建立体外心肌缺血再灌注(H/R)、缺血预适应(IPC)及缺血后适应(IPost)模型，从而分为对照组、缺氧/复氧(H/R)组、缺氧/复氧＋N1ICD感染(H/R＋N1ICD)组、缺血预适应(IPC)组、缺血预适应＋N1ICD干扰(IPC＋N1ICD－shRNA)组、缺血后适应(IPost)组、缺血后适应＋N1ICD干扰(IPost＋N1ICD－shRNA)组。采用凋亡检测试剂盒、活性氧(ROS)检测试剂盒分别检测细胞凋亡、细胞内ROS；采用免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化糖原合成酶激酶－3β/糖原合成酶激酶－3β(p－GSK－3β/GSK－3β)的表达。
结果心肌细胞凋亡率在对照组、H/R组、H/R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD－shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD－shRNA组分别为(5.34±1.70)%、(47.03±4.10)%、(33.89±12.25)%、(35.85±3.17)%、(51.12±8.22)%、(37.35±3.82)%、(47.90±3.08)%，差异有统计学意义(F＝18.47, P<0.05)。心肌细胞ROS在对照组、H/R组、H/R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD－shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD－shRNA组分别为624.66±79.52、1 221.87±63.66、913.12±115.82、935.85±201.62、1 204.03±113.82、967.15±106.11、1 296.59±222.38，差异有统计学意义(F＝8.77, P<0.05)；心肌细胞p－GSK－3β/GSK－3β比值在对照组、H/R组、H/R＋N1ICD组、IPC组、IPC＋N1ICD－shRNA组、IPost组、IPost＋N1ICD－shRNA组分别为0.58±0.12、0.62±0.20、1.24±0.09、1.16±0.12、0.72±0.15、1.16±0.12、0.75±0.12，差异有统计学意义(F＝11.21, P<0.05)。
结论Notch1作为内源性心肌保护因子，通过促进GSK－3β磷酸化，抑制心肌细胞凋亡，减轻心肌细胞ROS形成，从而减轻心肌缺血再灌注损伤。