【摘 要】
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目的:比较检测细胞凋亡时DNA变化的三种方法.方法:联合采用Hoechst33342和PI荧光双染显微镜观察,DNA凝胶电泳和流式细胞仪测定三种方法检测甘草提取物诱导MGC-803细胞凋亡时D
【机 构】
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中山大学生命科学学院生化系与新药开发中心,中国中医研究院基础理论研究所
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目的:比较检测细胞凋亡时DNA变化的三种方法.方法:联合采用Hoechst33342和PI荧光双染显微镜观察,DNA凝胶电泳和流式细胞仪测定三种方法检测甘草提取物诱导MGC-803细胞凋亡时DNA的变化.结果:低浓度药物作用时,荧光显微镜下观察到DNA凝聚和PI排斥,但DNA电泳不出现Ladder断裂片段,4℃重悬后FCM才能检测到凋亡峰;高浓度药物作用时,DNA呈Ladder断裂,FCM检测到凋亡峰,但荧光显微镜下观察到PI着色和DNA凝聚共存.结论:(1)应慎重使用依据PI着色区分凋亡和坏死细胞的方法;(2)有些情况下,凋亡细胞经乙醇固定后DNA断裂片段的逸出是一个缓慢的过程,通过4℃重悬可提高流式细胞仪检测凋亡细胞的准确性.
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