【摘 要】
：
设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗
【机 构】
：
中国科学院遗传研究所; 中国科学院生物物理研究所; 军事医学科学院基础研究所; 军事医学科学院基础研究所 北京 100101; 北京 100101;
【基金项目】
：
国家“八六三”计划;国家自然科学基金资助项目
论文部分内容阅读
设计并化学合成含有适当酶切位点及连接肽的寡核苷酸序列,与一定的背景载体连接并改造成适用于单链抗体表达的载体:外分泌型pWAI80和融合蛋白型pROH80从分泌抗人CD3单克隆抗体的杂交瘤细胞UCHT1中,经PCR扩增出轻、重链可变区基因V_H和V_K,并插入上述表达载体中构建成单链抗体基因.通过对鼠OKT3结合位点的结构模拟,并比较人、鼠抗体家族性保守序列,设计出改形OKT3的基因序列.化学法部分合成8个寡核苷酸片段,应用重叠PCR技术扩增出完整改形重链基因V_H,并克隆、酶切和测序鉴定.将所克隆V_H基因插入表达载体pCOMB3和 pGEX-4T-1中进行表达.经 IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和 Western blot分析以及 ELISA检测,结果发现分泌型表达产物及 M13基因Ⅲ-V_H改形单域抗体融合蛋白具有与CD3单抗竞争抑制的活性;而融合型单链抗体及改形单域抗体表达产物主要以包涵体形式存在,占细菌总蛋白的 30％左右.
其他文献
本文针对长庆油田开发区域的生态环境,从生产运行预防和事后控制两个方面,介绍了长庆油田构建"泵为核心的系统参数预警报警、集输系统干线截断阀紧急截断、原油泄漏预防性基
历经二十多年,我国固井设备制造已从初期的仿制发展到关键技术引进、自主创新开发,并与国际水平同步。设计、制造和控制新技术的研究应用,提高了大型固井设备的配套能力,大排
目的:探讨三阴乳腺癌的临床病理特征及预后影响因素。方法:回顾性分析确诊为乳腺癌并行手术切除的310例患者,根据ER、PR和HER-2抗体的表达分为三阴组80例和非三阴组230例,比
国内外数学史研究的历史非常久远,但数学史走向独立的学科发展并实现学科建制化却是在20世纪70～80年代.通过论述国内外数学史学科建制化的背景、数学史学会的建立、数学史杂志
目的:了解7岁以下儿童婴幼儿期喂养行为及辅食添加对其营养状况的影响,促进婴幼儿健康发育,为青少年时期健康饮食建立良好的基础。方法:采用自行设计的调查问卷,收集儿童婴幼
理想化方法作为科学方法中的一种,因其不仅仅是逻辑思维,还有明显的感性标志和实验的特征,掌握它有一定的难度,而将其放在《物理化学》这门理论性极强的学科中学习,就更显其
电力系统的供电可靠性是电力部门的一个重要课题,而高压设备的安全运行是整个系统安全运行的基础。随着国民经济的发展,社会对电力供应的可靠性要求越来越高,传统的定期停电
本文从文学心理批评与文化人类学的角度对《蝇王》与《黑暗之心》进行比较研究。两篇小说中的拜物主义同源于对未知环境的恐惧,而通过拜物,这种恐惧得以缓解。文章第一部分探
海洋平台各系统管线连接完成后,需进行压力试验。压力试验是评价各系统管线施工质量的有效手段,是对各系统管线综合性能的必要考察。压力试验达到检验标准,是海洋平台各系统
环己基氨基磺酸钠（N-cyclohexylsulfamic acid sodium salt，C6H11NHSO3Na），俗称“甜蜜素”，是卫生部允许使用的食品添加剂之一。在沿用常规样品分析的前处理中，国标法使用正己烷作