【摘 要】
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目的构建p VAX1-Hsp70/CD80质粒,观察其在体内外的表达,初步评估其有效性和安全性。方法HindⅢ和XbaⅠ酶切质粒pc DNA3.1-Hsp70/CD80和载体p VAX1,将目的基因Hsp70/CD80定向
【机 构】
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泸州医学院附属医院医学实验中心,成都中医药大学
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目的构建p VAX1-Hsp70/CD80质粒,观察其在体内外的表达,初步评估其有效性和安全性。方法HindⅢ和XbaⅠ酶切质粒pc DNA3.1-Hsp70/CD80和载体p VAX1,将目的基因Hsp70/CD80定向连接入p VAX1中,鉴定构建的质粒p VAX1-Hsp70/CD8。将p VAX1-Hsp70/CD80质粒转染人胚肾293T细胞,Western blot法检测在转染细胞中Hsp70和CD80蛋白瞬时和稳定表达情况。用100μg p VAX1-Hsp70/CD80嵌合DNA疫苗免疫小鼠后,于第7天、15天、30天和180天用RT-PCR方法观察Hsp70和CD80在各组织中表达,Real time PCR检测IFN-γ和IL-4在脾脏中的表达。结果经酶切和测序鉴定,重组质粒构建成功。转染24、48和72 h后的细胞以及G418筛选的稳定表达细胞株均有Hsp70和CD80的表达。第7天和第15天肌肉、淋巴结、骨髓、脾、肝、肺、肾和胸腺组织均有Hsp70和CD80表达。第30天肌肉、肺和肝有Hsp70表达。第180天均未检测出Hsp70和CD80表达。第7天和第15天IFN-γ有较高水平表达。结论成功构建了p VAX1-Hsp70/CD80质粒,该重组质粒在一定时间内能高效表达Hsp70和CD80,并能诱导IFN-γ较高表达。
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