探讨睡眠因子1(Slfn1)对内皮祖细胞(EPC)迁移的影响及其机制。
方法实验分为大鼠Slfn1腺病毒载体组(Ad–Slfn1组)、腺病毒阴性对照组(Ad–对照组)、大鼠发夹状RNA干扰Slfn1组(ShRNA–Slfn1组)、发夹状RNA阴性对照组(ShRNA–对照组)、空白对照组(未给予任何处理的内皮祖细胞)。分离培养大鼠骨髓源性EPC,用构建好的大鼠Slfn1腺病毒载体、发夹状RNA干扰Slfn1质粒及相应的对照质粒分别转染EPC,采用逆转录聚合酶链反应和蛋白印迹法检测细胞Slfn1、Cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平,Boyden小室检测细胞迁移能力,流式细胞技术检测细胞周期。
结果(1)质粒转染效率的检测结果:Ad–Slfn1组EPC中Slfn1mRNA表达水平高于Ad–对照组(P<0.05),Slfn1蛋白表达水平亦高于Ad–对照组(P<0.05)。而ShRNA–Slfn1组EPC中Slfn1mRNA表达水平低于ShRNA–对照组(P<0.05),Slfn1蛋白表达水平亦低于ShRNA–对照组(P<0.05)。(2)EPC迁移能力的检测结果:Ad–Slfn1组EPC迁移数目少于Ad–对照组(P<0.05)。而ShRNA–Slfn1组EPC迁移数目多于ShRNA–对照组(P<0.05)。(3)EPC细胞周期分布情况的检测结果:Ad–Slfn1组EPC分布于Gl期的数目多于Ad–对照组(P<0.05),而分布于S期的数目低于Ad–对照组(P<0.05)。而ShRNA–Slfn1组EPC分布于G1期的数目少于ShRNA–对照组(P<0.05),分布于S期的数目则多于ShRNA–对照组(P<0.05)。(4)Cyclin D1 mRNA和蛋白表达水平的检测结果:Ad–Slfn1组Cyclin D1 mRNA表达低于Ad–对照组(P<0.05),Cyclin D1蛋白表达水平亦低于Ad–对照组(P<0.05)。而ShRNA–Slfn1组mRNA表达水平高于ShRNA–对照组(P<0.05),Cyclin D1蛋白表达水平亦高于ShRNA–对照组(P<0.05)。
结论Slfn1可通过下游靶点Cyclin D1负性调控内皮祖细胞的迁移能力。