【摘 要】
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以肠道病毒71型（Enterovirus 71，EV71）为检测对象，建立了基于催化发夹组装和荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer，FRET）的生物传感器。设计了检测EV71 VP1基因的催化发夹组装信号放大策略，该体系由一对发夹探针（H1、H2）构成，H1和H2分别标记了荧光基团Cy3和Cy5。当体系中有VP1基因时，其可引发H1和H2催
【机 构】
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四川大学华西公共卫生学院四川大学华西第四医院
【基金项目】
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成都市科技局项目(（No.2022-YF05-00296-SN）； 四川大学大学生创新创业训练计划(（No.20221291L）；
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以肠道病毒71型（Enterovirus 71，EV71）为检测对象，建立了基于催化发夹组装和荧光共振能量转移（Fluorescence resonance energy transfer，FRET）的生物传感器。设计了检测EV71 VP1基因的催化发夹组装信号放大策略，该体系由一对发夹探针（H1、H2）构成，H1和H2分别标记了荧光基团Cy3和Cy5。当体系中有VP1基因时，其可引发H1和H2催化自组装反应，从而使得Cy3和Cy5相互靠近并发生荧光共振能量转移，导致Cy3荧光信号降低，Cy5信号增强；当体系中没有VP1基因时，H1和H2则稳定存在于反应体系中，不发生FRET。优化了缓冲液浓度、H1与H2的比例、反应温度和反应时间。在最优条件下，所构建的传感器的Cy5与Cy3的荧光强度比值与EV71的VP1基因浓度在0.5～20 nmol/L范围内呈良好的线性关系，检出限为73 pmol/L。咽拭子样品的加标回收率为99.6%～103.1%，相对标准偏差在0.3%～1.7%之间。本方法具有较好的特异性及抗干扰能力，在EV71监测和手足口病早期诊断方面具有良好的应用前景。
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