【摘 要】
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构建人SAA1原核表达载体,建立SAA1蛋白大肠杆菌表达条件和纯化工艺,评价重组SAA1蛋白在制备免疫学检测标准物质中的应用前景。采用同源重组的方法构建表达载体,在N端加入6×H
【机 构】
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江苏省医疗器械检验所; 南京诺唯赞生物科技有限公司; 南京诺唯赞医疗科技有限公司;
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构建人SAA1原核表达载体,建立SAA1蛋白大肠杆菌表达条件和纯化工艺,评价重组SAA1蛋白在制备免疫学检测标准物质中的应用前景。采用同源重组的方法构建表达载体,在N端加入6×His和SUMO标签帮助SAA1蛋白的可溶性表达和纯化;在小量体系中评价SUMO-SAA1蛋白的可溶性表达后,用镍亲和柱和阴离子交换层析方法纯化蛋白,用蛋白酶切除SUMO标签后再通过镍亲和柱层析方法获得高纯度人SAA1重组蛋白;用西门子N-Latex SAA试剂评价重组蛋白的免疫反应性和稳定性,并与SAA国际标准物质进行比较研究。结果表明SUMO-SAA1在大肠杆菌中大部分为可溶性表达且表达量高,产物纯度可达90%以上,稳定性良好并与SAA国际标准物质具有类似的免疫反应性。利用SUMO标签的助溶作用,成功在大肠杆菌中表达了人SAA1重组蛋白,该蛋白适合作为制备SAA1免疫检测的参考标准物质的原材料。
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