化学合成的Ac-SDKP类似物FAM-Aca-SDKP与HSC-T6细胞表面结合特征分析

来源 :中华肝脏病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hiketty
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目的

利用化学合成N-乙酰基-丝氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-脯氨酸(Ac-SDKP)类似物FAM-Aca-SDKP,探讨Ac-SDKP与肝星状细胞株(HSC-T6细胞)的结合及其结合的基本物理特征。

方法

化学合成携带绿色荧光的Ac-SDKP类似物短肽[5-FAM]-酪氨酸-氨基己酸-丝氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-脯氨酸(FAM-Aca-SDKP),实时定量PCR检测其对HSC胶原分泌影响验证其生物学效应与Ac-SDKP一致性,采用荧光显微镜观察FAM-Aca-SDKP与HSC-T6结合,采用流式细胞术检测FAM-Aca-SDKP与HSC-T6结合的时间-浓度效应。据资料不同采用t检验或秩和检验进行统计学分析。

结果

不同浓度的Ac-SDKP及FAM-Aca-SDKP与HSC-T6孵育24 h后,均观察到HSC-T6表达I型前胶原增加,而作用时间为0.5 h时,Ac-SDKP和FAM-Aca-SDKP导致I型胶原表达分别下降30%~50%;FAM-Aca-SDKP与HSC-T6共孵育后,在荧光显微镜下观察到细胞表面出现显著绿色荧光,给予Ac-SDKP竞争抑制可显著减少细胞表面的荧光强度;流式细胞术检测显示,在FAM-Aca-SDKP浓度为0~50 μmol/L时,荧光阳性细胞率从0快速上升至约12%,而在浓度为50~100 μmol/L,阳性细胞率仅从约12%上升至约14%,并且给予Ac-SDKP共孵育可显著降低阳性细胞百分率;FAM-Aca-SDKP阳性细胞数在孵育45 min达到高峰,随后逐渐降低。

结论

FAM-Aca-SDKP可结合于HSC-T6细胞表面,表现出竞争性抑制、可饱和、时间-浓度效应等配体-受体结合特征。

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