【摘 要】
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目的 探讨羽扇豆醇Lupeol通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法及碘化丙锭(PI)单染法检测Lupeol对肝癌细
【机 构】
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430060,武汉大学人民医院药学部武汉大学基础医学院;
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目的 探讨羽扇豆醇Lupeol通过Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制肝癌细胞增殖的作用机制.方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法及碘化丙锭(PI)单染法检测Lupeol对肝癌细胞的生长抑制作用及细胞周期的影响;以荧光素酶TOPflash/FOPflash报告系统检测Lupeol对HepG2细胞中Wnt信号通路的影响;Western blot法检测Lupeol对HepG2细胞中β-catenin蛋白表达的影响;荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Lupeol处理后c-Myc及细胞周期素D1(Cyclin D1)的mRNA表达水平;运用pGL3-Basic荧光素酶报告系统研究Lupeol对Cyclin D1启动子活性的影响.结果 Lupeol作用48h后,对HepG2细胞具有显著的抑制作用[细胞半数致死量半数抑制剂量(IC50)为(57.2±5.0) μmol/L].Lupeol处理HepG2细胞24、48 h使S期的细胞分布百分比上升至27％及42％;Top/Fop flash荧光素酶实验显示Lupeol使HepG2细胞中T细胞因子/淋巴增强因子(TCF/LEF)经典Wnt信号通路关键蛋白β-catenin介导的转录活性降低80％,并使细胞内累积的β-catenin的蛋白表达下调约30％,并减少了c-Myc及Cyclin D1的mRNA表达;同时其作用于Cyclin D1启动子使Cyclin D1的转录激活降低了3倍.结论 Lupeol可作用于Wnt/β-catenin信号通路进而抑制HepG2细胞增殖并呈现S期阻滞效应,其机制可能与减少β-catenin在细胞内累积及降低c-Myc与Cyclin D1的表达有关.
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