【摘 要】
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目的 构建嵌合抗原受体表皮生长因子受体Ⅲ型突变体单链抗体(EGFRvⅢscFv)-ICOS-CD3ζ表达载体.方法 将靶向EGFRvⅢscFv(726 bp)与第2代嵌合抗原受体的铰链区、跨膜区、胞内
【机 构】
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450003,郑州大学人民医院病理科450003,郑州大学人民医院消化科;山东省立医院消化科;
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目的 构建嵌合抗原受体表皮生长因子受体Ⅲ型突变体单链抗体(EGFRvⅢscFv)-ICOS-CD3ζ表达载体.方法 将靶向EGFRvⅢscFv(726 bp)与第2代嵌合抗原受体的铰链区、跨膜区、胞内信号区(Hinge-TM-ICOS-CD,648bp)通过重叠延伸聚合酶链反应(PCR)连接,克隆入表达载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP的EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ位点,测序确定DNA序列正确后脂质体法转染293T细胞,Western blot检测目的基因表达.结果 EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切和DNA测序显示嵌合抗原受体EGFRvⅢscFv-ICOS-CD3ζ各基因片段连接及序列正确,转染293T细胞48h后提取蛋白质,鼠抗人CDζ单抗免疫印迹显示目的基因为57×103的蛋白条带,与预算相对分子质量相符.结论 成功构建嵌合抗原受体EGFRvⅢscFv-ICOS-CD3ζ表达载体,为表达EGFRvⅢ的肿瘤靶向免疫治疗提供了研究基础.
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