【摘 要】
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以大豆细胞质雄性不育系配套保持系材料(JLCMS1)的黄化苗为材料,纯化得到线粒体。低熔点琼脂糖包埋线粒体成胶块,消化裂解后用HindⅢ部分酶切,通过脉冲场电泳回收40～60 kb酶切
【机 构】
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吉林大学植物科学学院,吉林省农业科学院生物中心,上海大学生命科学学院,
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以大豆细胞质雄性不育系配套保持系材料(JLCMS1)的黄化苗为材料,纯化得到线粒体。低熔点琼脂糖包埋线粒体成胶块,消化裂解后用HindⅢ部分酶切,通过脉冲场电泳回收40～60 kb酶切片段。将回收产物连接到载体pIndigo-BAC 5,通过电击转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,获得的BAC文库包含2 000个单克隆,平均插入片段大小约为50 kb,约覆盖大豆线粒体基因组250倍以上。
The mitochondria was purified from the yellow seedling of soybean CMS line JLCMS1. Low melting point agarose embedded mitochondrial gel, digestion and lysis after partial digestion with Hind Ⅲ, by pulse field electrophoresis recovery 40 ~ 60 kb digestion fragment. The recovered product was ligated to the vector pIndigo-BAC 5, and transformed into E. coli DH10B competent cells by electroporation. The obtained BAC library contained 2000 monoclonal clones with an average size of about 50 kb and about 250-fold coverage of the soybean mitochondrial genome.
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