【摘 要】
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目的 研究miR-210通过MMP-2调控M2/M1巨噬细胞比例对肺癌细胞生长的影响及对相关机制进行初步探讨.方法 将小鼠Lewis lung carcinoma (LLC)-1细胞皮下植入C57BL/6小鼠构建小鼠肺癌模型,荧光定量PCR检测miR-210表达.进一步取40只肺癌建模成功的小鼠,并随机分为4组:对照组小鼠尾静脉注射AAV9-Fugw腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210腺相关病毒;AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-
【机 构】
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161000,齐齐哈尔医学院附属第三医院放疗科
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目的 研究miR-210通过MMP-2调控M2/M1巨噬细胞比例对肺癌细胞生长的影响及对相关机制进行初步探讨.方法 将小鼠Lewis lung carcinoma (LLC)-1细胞皮下植入C57BL/6小鼠构建小鼠肺癌模型,荧光定量PCR检测miR-210表达.进一步取40只肺癌建模成功的小鼠,并随机分为4组:对照组小鼠尾静脉注射AAV9-Fugw腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210腺相关病毒;AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-MMP-2腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210+AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210和AAV9-OE-MMP-2腺相关病毒.所有小鼠注射腺相关病毒滴度为108TU,病毒注射时间为4周.检测4组小鼠肿瘤大小变化,WGA染色检测4组小鼠肺癌细胞大小变化.另外,取生长融合至80％的LLC1细胞,并随机分为2组:WT组转染包含野生型MMP-23\'-UTR的构建物,Mut组转染突变型MMP-23\'-UTR的构建物.细胞转染48 h后,荧光素酶实验检测miR-210和MMP-2(matrix metalloproteinases-2)的结合情况.另取生长融合至80％的LLC1细胞,并随机分为3组:对照组常规培养细胞,不给予任何特殊处理;miR-210 mimic组给予50 μmol/L的miR-210 mimic药物刺激;miR-210 inhibitor组给予100 μmol/L的miR-210 inhibitor药物刺激,以上细胞处理48 h后进行检测.荧光定量PCR检测小鼠肺组织中巨噬细胞M1型标志物白细胞介素IL-6和诱导型一氧化氮合酶iNOS的表达以及M2型标志物精氨酸酶Arg-1和白细胞分化抗原CD206的表达.结果 荧光定量PCR实验显示,miR-210在小鼠肺癌组织中表达下调;肿瘤质量检测发现,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210后肿瘤质量减轻,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-sh-miR-210后肿瘤质量增加;WGA染色结果发现,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210后肺癌细胞变小,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-sh-miR-210后肺癌细胞变大.荧光定量PCR结果发现,肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210后,小鼠肺组织中巨噬细胞M1型标志物白细胞介素IL-6和诱导型一氧化氮合酶iNOS表达升高,M2型标志物精氨酸酶Arg-1和白细胞分化抗原CD206表达明显降低;肺癌小鼠尾静脉注射AAV9-sh-miR-210后,小鼠肺组织中巨噬细胞M1型标志物白细胞介素IL-6和诱导型一氧化氮合酶iNOS表达降低,M2型标志物精氨酸酶Arg-1和白细胞分化抗原CD206表达明显升高.荧光素酶实验发现miR-210可以和MMP-23\'-UTR区域结合.肿瘤质量检测和WGA染色发现,过表达miR-210可以逆转过表达MMP-2导致的肿瘤质量增加和肺癌细胞的变大.结论 miR-210通过调控M2/M1巨噬细胞比例抑制肺癌细胞生长.
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