bmi-1shRNA逆转录病毒表达载体的构建及稳定转染LoVo细胞系的建立

来源 :肿瘤防治研究 | 被引量 : 0次 | 上传用户：menes127

【摘要】

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目的构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体，建立稳定转染的LoVo细胞系，探讨稳定转染bmi-1shRNA对大肠癌细胞LoVo靶基因表达的影响，为下一步应用RNAi技术治疗打下基础

【作者】

：

汪云霞魏亚明王晓华朱晓莹黄颖烽

【机构】

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广州医学院生化教研室,广州医学院附属广州市第一人民医院中心实验室广州市临床医学研究所

【出处】

：

肿瘤防治研究

【发表日期】

：

2010年3期

【关键词】

：

BMI-1基因 RNA干扰结肠癌细胞转染短发夹RNA bmi- 1 RNA interference Colorectal cancer Trans

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目的构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体，建立稳定转染的LoVo细胞系，探讨稳定转染bmi-1shRNA对大肠癌细胞LoVo靶基因表达的影响，为下一步应用RNAi技术治疗打下基础。方法设计合成靶向bmi-1基因编码短发夹RNA的两条寡核苷酸序列，另设计无义对照序列，构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-C，载体经脂质体2000介导转染LoVo细胞，通过嘌呤霉素筛选，建立稳定转染的LoVo细胞系，显微镜观察、MTT检测、荧光定量PCR、Western blot检

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