【摘 要】
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用体外定向进化技术提高了β-琼胶酶AgaB热稳定突变酶M446的催化活性。采用易错PCR和化学诱变法相结合的方法，构建了M446的突变体文库；利用琼胶酶降解琼胶在平板上产生水解圈的
【基金项目】
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863计划(2004AA625020)资助项目
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用体外定向进化技术提高了β-琼胶酶AgaB热稳定突变酶M446的催化活性。采用易错PCR和化学诱变法相结合的方法，构建了M446的突变体文库；利用琼胶酶降解琼胶在平板上产生水解圈的特性，建立了阳性克隆的高通量筛选体系。最终筛选得到酶活性得到提高且保持较高耐热性的突变酶M117，其酶活提高为突变酶M446的3倍。测序分析发现编码突变酶M117的DNA序列中有4处点突变，其中2处为同义突变，另外2处引发氨基酸替换，分别为R9K和1111V。对突变酶M117与M446的动力学常数进行了比较，发现M117的Km值
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