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目的
建立儿童新发呼吸道病毒的多重实时荧光定量PCR检测方法，并利用该方法进行临床标本的检测。
方法根据人类偏肺病毒、冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、人博卡病毒、KI多瘤病毒和WU多瘤病毒的保守区域设计并合成引物和探针，确定引物和探针的特异性，优化引物和探针的组合浓度，通过检测具有类似临床症状的其他病原体的标本评价该多重荧光定量PCR方法的特异性，构建质粒标准品用于分析检测该方法的灵敏度和重复性；并对2009至2012年湖州市妇幼保健院及湖州市中心医院收集的322例呼吸道感染患儿的痰液标本进行检测分析。
结果成功建立了这6种新发呼吸道病毒的多重荧光定量PCR检测方法，能够同时或分别对其进行检测。体系中筛选的引物和探针具有很好的特异性，并优化出适合的引物探针组合浓度，灵敏度分析最低检测限为10拷贝数/μl，重复性分析中批内变异系数（CV）为1.2%~3.4%，批间CV为0.08%~0.85%，均小于5%。322份临床标本中，人类偏肺病毒阳性17份，阳性率5.28%，人博卡病毒9份，阳性率2.80%，未检到冠状病毒HKU1、冠状病毒NL63、KI多瘤病毒和WU多瘤病毒。
结论多重荧光定量PCR方法具有简单快速，灵敏性和特异度高等特点，并且能实现多种新发病毒同时并行检测，可为儿童呼吸道新发病毒感染的临床诊治提供技术支持。（中华检验医学杂志,2013,36:538-542）