【摘 要】
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目的通过将发生点突变的两个大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因进行改造,获得具有正确序列的OSCP基因,在大肠杆菌中表达并进行活性鉴定.方法通过限制性核酸内切酶和T4DNA连接
【机 构】
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山西医科大学医学实验中心,山西医科大学寄生虫学教研室,上海交通大学医学院
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目的通过将发生点突变的两个大鼠寡霉素敏感相关蛋白(OSCP)基因进行改造,获得具有正确序列的OSCP基因,在大肠杆菌中表达并进行活性鉴定.方法通过限制性核酸内切酶和T4DNA连接酶将发生错义突变的两个OSCP基因的DNA克隆进行改造,获得具有正确核苷酸序列的OSCP基因;然后将该片段连接进原核表达载体pET-28c(+),构建成重组质粒PET-28c(+)-OSCP;用该重组质粒转化E.coli,转化子在37℃诱导表达相应的融合蛋白,通过Western-blot鉴定.结果酶切及测序显示对OSCP基因错义突变的纠正获得成功.酶切结果显示成功构建了原核表达载体pET-28c(+)-OSCP.IPTG诱导表达4 h后,SDS-PAGE及Western-blot显示诱导表达出分子量约23 000的大鼠寡霉素敏感相关蛋白,且该蛋白具有免疫活性.结论在国内初次表达出大鼠OSCP,表达产物具有免疫反应性,为OSCP的结构及功能研究奠定了基础.
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