PMA-qPCR快速检测结核活菌方法的建立

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【摘要】

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为建立快速鉴别诊断结核活/死菌的方法，本研究应用PMA染料与实时定量PCR技术结合（PMA-qPCR），以结核标准株16 sRNA基因为靶基因，PMA对样品基因组提取物进行处理，PMA能够与死细胞DNA

【作者】

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温书香王慧勤曹旭东赵新霞李亚张亚丽陈鹏博纪太旺

【机构】

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石河子大学动物科技学院,新疆地方与民族病高发病教育部重点实验室,石河子大学医学院

【出处】

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石河子大学学报：自然科学版

【发表日期】

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2014年2期

【关键词】

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叠氮溴化丙锭(PMA) PMA-qPCR技术活死菌 propidium monoazidePMA-qPCR technologylive/dead cell

【基金项目】

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卫生部“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项（2013ZX10003003）,国家自然科学基金项目（31060333）

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为建立快速鉴别诊断结核活/死菌的方法，本研究应用PMA染料与实时定量PCR技术结合（PMA-qPCR），以结核标准株16 sRNA基因为靶基因，PMA对样品基因组提取物进行处理，PMA能够与死细胞DNA分子共价交联并抑制DNA分子扩增。结果显示：PMA浓度在3μg/mL，曝光时间大于15 min时，PMA既不影响活菌的的扩增，又能有效抑制死菌的扩增；当PMA浓度大于20μg/mL时，PMA影响活菌DNA的扩增；PMA-qPCR技术能够定量不同比例的结核活/死菌悬液中的活菌。结论：PMA-qPCR技术能够快

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