【摘 要】
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目的针对结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因463密码子设计发夹DNA探针,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中发夹DNA探针与katG基因463密码子扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出
【机 构】
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第三军医大学第一附属医院检验科,解放军第452医院检验科
【基金项目】
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国家自然科学基金(30571775、30970879);CQ CSTC(2009BB5140);重庆市计生委课题(2008-5)
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目的针对结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因463密码子设计发夹DNA探针,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中发夹DNA探针与katG基因463密码子扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacon designer设计katG基因包含463密码子的发夹DNA探针,应用荧光分光光度计检测扩增片段与探针杂交后荧光信号,同时对扩增产物测序并作比较。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐异烟肼katG基因463密码子PCR产物与发夹DNA探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;16株耐异烟肼组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐异烟肼组katG基因463密码子突变检出率为34%,测序法突变检出率为37%。结论应用荧光分光光度计直接观测发夹DNA探针液相杂交荧光具简单、灵敏等优特点;katG基因463密码子突变是结核分枝杆菌耐异烟肼的主要原因之一。
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