【摘 要】
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构建针对非洲猪瘟病毒（ASFV） CD2v蛋白的重组核酸疫苗并评价其免疫原性。通过PCR扩增目的基因CD2v、LTB、CD2v+LTB，分别连接至pc DNA3.1（-）载体，获得重组表达质粒，经双酶切和测序验证正确后，提取无内毒素质粒转染293T细胞，通过Western-blot验证重组蛋白的表达，并用其注射小鼠进行免疫，对免疫效力进行评价。Western-blot结果表明，构建的重组表达质粒可
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（31960641）； 贵州省科技创新人才团队项目（黔科合平台人才[2019]5615）； 贵州省科技支撑计划项目（黔科合支撑[2017]2585,黔科合支撑[2017]2587）；
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构建针对非洲猪瘟病毒（ASFV） CD2v蛋白的重组核酸疫苗并评价其免疫原性。通过PCR扩增目的基因CD2v、LTB、CD2v+LTB，分别连接至pc DNA3.1（-）载体，获得重组表达质粒，经双酶切和测序验证正确后，提取无内毒素质粒转染293T细胞，通过Western-blot验证重组蛋白的表达，并用其注射小鼠进行免疫，对免疫效力进行评价。Western-blot结果表明，构建的重组表达质粒可以在体外表达出目的蛋白。注射小鼠后，外周血CD4+T淋巴细胞的比例升高；ELISA检测发现，与pc DNA3.1（-）和PBS组相比，pc DNA3.1-CD2v+LTB组的INF-γ、IL-2、IL-4水平均极显著升高（P＜0.01）。pc DNA3.1-CD2v和pc DNA3.1-CD2v+LTB组相比，pc DNA3.1-CD2v+LTB的INF-γ、IL-2水平差异显著（P＜0.05），而IL-4含量有差异但不显著，无统计学意义（P＞0.05）。注射pc DNA3.1-CD2v质粒的小鼠血清效价约为1∶12 800，注射pc DNA3.1-CD2v+LTB质粒的小鼠血清效价约为1∶25 600。上述结果表明，本试验构建的重组核酸疫苗pc DNA3.1-CD2v、pc DNA3.1-CD2v+LTB、pc DNA3.1-LTB及抗原CD2v能够显著刺激小鼠的体液免疫和细胞免疫，LTB能够显著提高核酸疫苗的免疫应答。
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