【摘 要】
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目的 通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽(Aβ)人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增鼠源性抗体全长基因,并通过Blast对其序列进行分析;利用重组PCR技术拼接重轻链可变区及人IgG1的恒定区基因,并对重链Fc段进行定点突变以降低排斥反应;分别构建
【机 构】
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100005,中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础学院病理学系,100005,中国医学科学院基础医学研究所,北京协和医学院基础学院病理学系,100005,中国医学科学院基础医学研究所,北京
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目的 通过基因工程抗体技术构建和表达抗β-淀粉样多肽(Aβ)人-鼠嵌合抗体,减低鼠源单克隆抗体在临床应用中引起的人体免疫排斥反应.方法从分泌抗Aβ1-42鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株中提取总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增鼠源性抗体全长基因,并通过Blast对其序列进行分析;利用重组PCR技术拼接重轻链可变区及人IgG1的恒定区基因,并对重链Fc段进行定点突变以降低排斥反应;分别构建人-鼠嵌合基因重轻链表达载体,用脂质体法将其同时导入COS-7细胞中表达,并利用ELISA和免疫组织化学(SP法)对分泌的抗体功能和性质进行初步鉴定.结果 Blast比对分析结果显示克隆的基因序列符合小鼠抗体基因序列,将可变区基因与人IgG1的恒定区基因拼接以及Fc定点突变后,成功构建了嵌合抗体的真核表达载体,并实现真核表达;ELISA和免疫组织化学方法证实了所分泌抗体的人源性和与Aβ的结合特异性.结论成功地构建和表达了抗阿尔茨海默病Aβ人-鼠嵌合抗体,为其在阿尔茨海默病的临床诊治中应用和进一步改造奠定了基础。
其他文献
卵巢上皮肿瘤约占卵巢良性肿瘤的50%和恶性肿瘤的85%～90%.原发性卵巢黏液性肿瘤病变特征为单侧发病、大小>150 mm、包膜光滑和无卵巢外扩散、腺体融合或膨胀性生长、浸润间质.原发性卵巢黏液性癌的发生通常与交界性黏液肿瘤有关。
患者女,27岁.因"停经36周,胎死宫内"于2008年9月收住院.患者平素月经规律,孕60~+d出现恶心、呕吐等早孕反应,孕4~+个月后始自觉胎动,孕2个月余在外院查单纯疱疹病毒型-IgG(+)。
患者男,10岁.因头晕、恶心、嗜睡6 d,言语不能2 d于2009年12月9日入院.患者于6 d前无明显诱因出现头晕、恶心,嗜睡,有少量咳嗽、低热在上海某医院诊为上呼吸道感染,给予输液治疗,症状无好转,2 d前出现昏睡,言语不能,行走不能再去上海某医院诊治,经颅脑CT示颅内肿瘤,遂转入本院治疗.追问病史,患者5个多月前,在本院因脑积水行脑室腹腔分流术,术后恢复良好。
患者女,37岁.因原发闭经、卵巢肿物4个月入院.患者曾于2008年10月在外院行双侧附件切除术,术中见肿物位于卵巢,盆腔其他部位未见肿物,术后病理不详.4个月后肿瘤复发,遂于2009年3月在北京协和医院行子宫、大网膜、回盲部等二次手术切除。
患者男,23岁.自出生40d发现右足畸形及肥大,随着患者成长躯干和四肢逐渐出现多发性小肿块,尤其右下肢生长迅速肥大很快累及整个下肢.近5年右下肢生长肥大加快以致右下肢太重造成患者不能翻身和行走,于2008年11月27日入院治疗。
患者女,4岁.洗澡时无意发现腹部包块3 d,未伴随其他症状,于2009年8月18日入院.体检:腹软,左侧稍膨隆,可触及约10 cm×10 cm大小肿块,活动度差,边界清,压痛阴性,肝脾肋缘下未触及,移动性浊音阴性.彩超显示:左肾区探及11.8 cm×7.1cm不均匀略低回声,边界清,形态欠规则.肿物内血供丰富。
患儿男,6岁.因右肾上腺区肿物1年于2007年12月入院.既往有遗传性球形红细胞增多症病史,脾功能亢进,曾多次输血治疗.体检:体温36.3℃,呼吸16次/min,脉搏88次/min,血压13/7 kPa(1 KPa=7.5 mm Hg).神志清,反应可,皮肤苍黄,浅表淋巴结未及肿大,心肺(-),肝右肋下6 cm,脾左肋下16 cm。
目的 探讨胸腺上皮性肿瘤的临床病理学特点,评价2004年WHO胸腺肿瘤分类的可重复性及其临床意义.方法 收集2001年1月至2009年6月间52例胸腺七皮性肿瘤的资料,对其形态学特征和免疫表型进行回顾性复习,按照2004年WHO胸腺肿瘤分类进行组织学分型,并对临床资料加以分析和总结.结果 胸腺瘤45例,胸腺癌7例.胸腺瘤中以AB型最多见,占33.3%(15/45),其次为B2型和B3型,均为20.
套细胞淋巴瘤根据形态特征可分为经典型和变异型.经典型主要表现为中小淋巴细胞单一性增生、不规则核和核仁不明显;变异型主要包括母细胞性套细胞淋巴瘤和多形性套细胞淋巴瘤,临床表现通常具有更强的侵袭性.套细胞淋巴瘤的免疫表型为表达全B细胞抗原和细胞周期蛋白D1(cyclin D1),通常CD5+、CD10-、CD23-和FMC7+。
我们对2007年至2008年间南京军区南京总医院开展的4例异体小肠移植患者的194个肠黏膜活检标本(截至2009年5月1日)进行动态观察、分析,以提高对小肠移植后急性排异反应形态变化的认识。