【摘 要】
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本试验旨在通过定向进化技术提高角蛋白酶的热稳定性,以拓展角蛋白酶在饲料工业的适用性.试验采用易错PCR方法对地衣芽孢杆菌CP-16的角蛋白酶进行定向进化,筛选获得耐温性好的突变体,并对其进行酶学性质研究与结构功能分析.结果 表明,从5000个突变体中获得3株正向角蛋白酶突变体A307V/S346T、R70G、N245K,其角蛋白酶热稳定性得到了提高.酶学性质研究发现,角蛋白酶突变体R70G热稳定性最强,在75℃热处理5 min后残留酶活性达30.65％,而野生型角蛋白酶热处理5 min后残留酶活性仅1.0
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,动物营养学国家重点实验室,北京 100193;山西农业大学动物科学学院,太原 030801
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本试验旨在通过定向进化技术提高角蛋白酶的热稳定性,以拓展角蛋白酶在饲料工业的适用性.试验采用易错PCR方法对地衣芽孢杆菌CP-16的角蛋白酶进行定向进化,筛选获得耐温性好的突变体,并对其进行酶学性质研究与结构功能分析.结果 表明,从5000个突变体中获得3株正向角蛋白酶突变体A307V/S346T、R70G、N245K,其角蛋白酶热稳定性得到了提高.酶学性质研究发现,角蛋白酶突变体R70G热稳定性最强,在75℃热处理5 min后残留酶活性达30.65％,而野生型角蛋白酶热处理5 min后残留酶活性仅1.06％.由此可见,本研究成功获得热稳定性较好的角蛋白酶突变体,拓展了角蛋白酶的适用性,为耐热角蛋白酶开发和相关基因信息探索提供了参考.
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