【摘 要】
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目的 建立携带突变位点(cDNA 596T＞ C)的人Lumican(LUM)基因的转基因鼠模型.方法 实验研究.利用基因重组技术,将人工合成的LUM基因第二外显子596位碱基T替换为C,再克隆到质粒pRP.Des3d的多克隆位点,构建pRP.EX3d-EFlA＞ LUM/flag＞ IRES/hrGFP质粒载体;然后用显微注射法将其转至BDF1小鼠受精卵雄原核中,存活的受精卵再移入美国癌症研究所
【机 构】
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100730首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科学与视觉科学重点实验室,100730首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心北京市眼科学与视觉科学重点实验室,100730首都医科
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目的 建立携带突变位点(cDNA 596T＞ C)的人Lumican(LUM)基因的转基因鼠模型.方法 实验研究.利用基因重组技术,将人工合成的LUM基因第二外显子596位碱基T替换为C,再克隆到质粒pRP.Des3d的多克隆位点,构建pRP.EX3d-EFlA＞ LUM/flag＞ IRES/hrGFP质粒载体;然后用显微注射法将其转至BDF1小鼠受精卵雄原核中,存活的受精卵再移入美国癌症研究所(ICR)假孕雌鼠输卵管内,得到可表达LUM基因的F0代转基因小鼠C57-TgN(LUM) CCMU.经PCR、免疫印迹杂交法分析子代鼠中基因整合及表达的情况.结果 得到31只新生仔鼠,PCR检测有6只LUM阳性转基因鼠,免疫印迹杂交法证明转基因阳性鼠转入的目的基因片段确实合成了相应蛋白质.稳定遗传3代,共获得128只仔鼠,经PCR检测其中有68只为LUM阳性,阳性率达53.13％.结论 携带突变位点(cDNA 596T＞C)的LUM基因的转基因鼠模型构建成功,为进一步探索LUM基因突变对病理性近视眼的发生发展及细胞外基质成分的影响提供了重要的研究平台。
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