【摘 要】
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在食品检测、法医鉴定、分子诊断等领域经常需要对未提纯DNA的非规范处理标本进行聚合酶链式反应（PCR）扩增。然而,由于非处理标本中存在多种抑制成分,常见的DNA聚合酶并不能满
【机 构】
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佛山市南海区人民医院; 南京工业大学食品与轻工学院; 南京诺唯赞生物科技有限公司; 武汉生物工程学院生命科学与技术学院;
【基金项目】
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江苏省重点领域共性技术攻关项目(苏经信科技(2016)636号)
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在食品检测、法医鉴定、分子诊断等领域经常需要对未提纯DNA的非规范处理标本进行聚合酶链式反应（PCR）扩增。然而,由于非处理标本中存在多种抑制成分,常见的DNA聚合酶并不能满足非处理标本的检测需求。本研究通过调节添加剂、Mg2+浓度以及酶量,对Phanta DNA聚合酶进行反应条件优化,提升Phanta DNA聚合酶突变体的扩增性能,并考察该聚合酶在优化条件下对血液、植物和食品等非处理标本的检测性能。结果表明:在反应缓冲溶液SF Buffer中加入质量分数5%二甲基亚砜（DMSO）和3 mmol/L Mg2+,以及50μL反应体系中使用1U酶时,Phanta DNA聚合酶突变体具有最强的扩增性能,可对低至0.05 ng基因组、植物叶片粗提液、高达40%全血浓度及食品粗提液进行有效检测,性能优于普通Taq DNA聚合酶及未进行反应条件优化的Phanta DNA聚合酶。本研究在食品检测、法医鉴定、分子诊断等应用中非处理标本的检测具有极大应用价值。
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