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目的 构建表达miR．10a的重组腺病毒（adenovirus，Ad）载体。方法用红色荧光蛋白mCherry基因替换穿梭质粒pDC316-EGFP—U6的增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）报告基因。利用表达siRNA的策略，合成编码miR-10a的长链DNA序列，双链退火后克隆至pDC316，mCherry—U6获得pDC316-mCherry—U6-miR-10α。pDC316-mCherry-U6-miR-10α与骨架质粒pBHGlox△E1，3Cre共转染HEK293细胞，包装成复制缺陷型重组腺病毒Ad-miR-10α空斑形成实验纯化、扩增、滴定重组腺病毒。Ad-miR-10α感染HeLa细胞后在荧光显微镜下观察mCherry表达，用RT—qPCR检测miR-10α表达。结果构建的pDC316-mCherry—U6-miR-10α序列正确，荧光显微镜下可见mCherry的表达，重组腺病毒Ad—miR-10α滴度为1．8×10^7pfu／mL，感染HeLa细胞后miR-10α表达较mock高40倍。结论成功构建了表达miR-10α的首组腺病毒．siRNA表达策略可用于miRNA的人工表达。