目的 探索一种适用于临床标本检测的肺炎支原体套式PCR-P1-RFLP基因分型方法并对其应用进行评价.方法 参考肺炎支原体标准株P1基因RepMp4及RepMp2/3序列,分别在两个序列内部设计4条内套引物,采用文献报道的外套引物及新设计内套引物进行套式PCR扩增,扩增产物混合后用HaeⅢ酶切,根据不同的酶切图谱结果判断其型别,同时采用测序验证;对标准株DNA及临床标本DNA倍比稀释后进行检测,验证新改良方法敏感性;收集2012年肺炎支原体感染阳性标本,采用研究新改良的方法进行分型检测并与现有方法进行比较.结果 经测序验证,以套式PCR为基础的P1-RFLP基因分型方法能够对临床标本进行很好的扩增;与现有的分型方法相比,新改良方法敏感性提高103倍,差异有统计学意义;北京地区2012年儿科肺炎支原体流行基因型为Ⅰ型.结论 套式PCR-P1-RFLP基因分型方法敏感性高,能够对临床标本进行很好的扩增。