【摘 要】
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[目的]探讨Runx2过表达慢病毒对人牙周韧带细胞(PDLCs)体外增殖和成骨能力的影响.[方法]体外培养PDLCs,取对数期细胞分为空白对照组(BC组,不做任何处理)、阴性对照组[NC组,用
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属梨园医院口腔科,湖北 武汉,430077;长沙市口腔医院修复科,湖南长沙,410000
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[目的]探讨Runx2过表达慢病毒对人牙周韧带细胞(PDLCs)体外增殖和成骨能力的影响.[方法]体外培养PDLCs,取对数期细胞分为空白对照组(BC组,不做任何处理)、阴性对照组[NC组,用感染复数(MOI)=50的不合Runx2基因的慢病毒感染细胞]、Runx2组(用MOI=50的Runx2过表达慢病毒转染细胞).转染48h后荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计算转染效率.采用噻唑蓝比色法(MTT)检测各组细胞体外增殖情况,采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法(Western Blot)检测各组细胞Runx2、骨形成蛋白-2(BMP-2)、碱性磷酸酶(ALP)和骨桥蛋白(OPN)表达.[结果]转染48 h后,BC组未见绿色荧光蛋白,Runx2组和NC组可见大量细胞表达绿色荧光蛋白.Runx2组和NC组转染效率分别为(88.57±3.07)%和(89.43±2.09)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).Runx2组在不同时间点的活细胞数目OD值均明显大于NC组和BC组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而NC组和BC组的活细胞数目OD值比较差异无统计学意义(P>0.05);Runx2组Runx2、BMP-2、ALP和OPN的mRNA、蛋白表达量显著高于NC组和BC组,差异均有统计学意义(均P<0.05);而NC组和BC组的Runx2、BMP-2、ALP和OPN的mRNA表达量比较差异无统计学意义(P>0.05).[结论]Runx2过表达慢病毒能够促进PDLCs体外增殖和增强其成骨能力,在牙周组织修复、再生中有重要应用前景.
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