【摘 要】
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目的建立干酪乳杆菌LC2W电转化的最优条件。方法研究了不同质粒、细胞壁弱化剂浓度、电场强度、复苏时间以及质粒浓度对电转效率的影响,通过单因素轮换法进行了逐一优化。结
【机 构】
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光明乳业研究院乳业生物技术国家重点实验室;
【基金项目】
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国家“十二五”科技支撑计划课题(2013BAD18B01);国家“十二五”863项目(2011AA100901)~~
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目的建立干酪乳杆菌LC2W电转化的最优条件。方法研究了不同质粒、细胞壁弱化剂浓度、电场强度、复苏时间以及质粒浓度对电转效率的影响,通过单因素轮换法进行了逐一优化。结果经过对乳杆菌感受态制备及电转过程中各因素的考察,得到最佳的参数条件为:添加1%甘氨酸作为细胞壁弱化剂制成感受态细胞,电场强度为10 kV/cm进行高压电击后,复苏3 h,质粒浓度为200 ng/μL时,能够达到最高的电转效率为1.25×106 CFU/μg DNA。结论经优化后,获得了较高的转化水平,可用于指导多种乳杆菌的高效电转,并且为下一步的LC2W菌株改造和基因功能探究奠定了基础。
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