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摘要:采用RT-PCR和TA克隆技术,从水稻品种日本晴中扩增出类整合素候选基因(integrin-like protein,ILP)OsILP的cDNA片段。经测序鉴定,克隆获得的目的片段长为1 167 bp,包含完整的CDS,编码388个氨基酸,预测分子量43 ku。进而将该片段连接至表达载体pTCK303中,通过PCR鉴定与酶切验证,结果表明成功构建了pTCK303-OsILP过表达载体。并将表达载体质粒转化为农杆菌EHA105,再通过农杆菌介导将其导入水稻日本晴的愈伤中,经遗传转化,阳性鉴定,获得了过表达转OsILP基因水稻株系。
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胞。对所获得的白斑菌落通过菌液PCR 扩增验证后,按照上海捷瑞生物工程有限公司质粒小提试剂盒说明书提取质粒,并送至南京金斯瑞生物科技有限公司测序,以确定其是否为重组克隆载体pMD19-T-OsILP。
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将构建的过表达载体导入农杆菌EHA105,再通过根癌
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