【摘 要】
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目的探讨外源性p14ARF基因表达于胰腺癌PC-3细胞后与另一重要细胞周期调控蛋白p53表达水平的相互关系.方法将含人p14ARF cDNA的重组质粒通过脂质体介导转染入胰腺癌PC-3细胞
【机 构】
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复旦大学附属华山医院胰腺癌诊治中心上海,复旦大学附属肿瘤医院分子生物实验室
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目的探讨外源性p14ARF基因表达于胰腺癌PC-3细胞后与另一重要细胞周期调控蛋白p53表达水平的相互关系.方法将含人p14ARF cDNA的重组质粒通过脂质体介导转染入胰腺癌PC-3细胞中,并筛选出阳性克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测PC-3细胞转染前后p14ARF的mRNA及蛋白的表达,同时用Western blot分析其内源性p53蛋白表达水平的变化.噻唑蓝(MTT)比色法测定PC-3细胞在转染前、后的生长曲线变化.结果胰腺癌PC-3细胞中p14ARF基因缺失.外源性p14ARF基因成功转染入PC-3细胞并获得14×103大小的p14蛋白表达,且内源性p53蛋白表达水平在转染后明显增高.PC-3细胞在导入p14ARF基因后第1天及第5天的生长抑制率分别为22%及26%,两者差异有显著性(P《0.05).结论 p14ARF基因可上调胰腺癌PC-3细胞的内源性p53蛋白表达水平,从而发挥其细胞周期阻滞功能.
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