【摘 要】
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目的 克隆腐食酪螨第13组变应原基因(Tyr p 13),表达纯化其重组蛋白,并进行免疫学特性鉴定,利用生物信息学软件分析该过敏原抗原表位等信息.方法 挑取腐食酪螨,提取螨总RNA.
【机 构】
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深圳大学过敏反应与免疫学研究所,广东深圳518060;深圳大学第三附属医院变态反应科,广东深圳518060
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目的 克隆腐食酪螨第13组变应原基因(Tyr p 13),表达纯化其重组蛋白,并进行免疫学特性鉴定,利用生物信息学软件分析该过敏原抗原表位等信息.方法 挑取腐食酪螨,提取螨总RNA.逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增cDNA,根据已知的Tyr p 13基因序列(GeneBank登录号AY710432.1)设计引物,PCR大量扩增目的基因.构建原核表达载体pET-32a(+)-Tyr p 13,转化感受态细胞E.coli Rosetta (DE3),用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导目的蛋白表达;层析纯化表达产物,免疫印迹(Western Blot)法检测纯化后的表达产物免疫学活性;通过生物信息学软件推测其抗原表位、构建进化树.结果 克隆得到的序列经基因测序可知其长度约400 bp,其表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分子量约为14 kD,呈可溶性表达.免疫印迹结果显示,Tyr p 13能够与过敏患者血清IgE特异性结合,表明其具有过敏原性;表位分析进一步证实该过敏原具有免疫原性.结论 经克隆表达、纯化后得到纯度较高的腐食酪螨Tyr p 13,为进一步开展临床特异性诊断和治疗提供参考.
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