【摘 要】
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建立HPV16-E7基因的RNAi细胞模型,可为进一步研究HPV16-E7蛋白作用及致癌机制提供物质前提。选择HPV16-E7基因特异的siRNA片段,构建慢病毒siRNA重组表达载体,经293FT病毒包装
【机 构】
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新疆医科大学第一附属医院,新疆医科大学基础医学院,新疆医科大学新疆地方病分子生物学重点实验室,
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建立HPV16-E7基因的RNAi细胞模型,可为进一步研究HPV16-E7蛋白作用及致癌机制提供物质前提。选择HPV16-E7基因特异的siRNA片段,构建慢病毒siRNA重组表达载体,经293FT病毒包装细胞转染产生重组病毒,并以此感染HPV16阳性SiHa宫颈癌细胞、抗菌素筛选和分子生物学鉴定,建立了稳定表达HPV16-E7-siRNA的RNAi细胞模型。该细胞模型,对目标基因(E7)表达的抑制效率,也以蛋白免疫印迹和RT-PCR确证。由此得出,利用慢病毒载体和HPV16-E7基因特异的siRNA片段,可以建立一种稳定、有效和可行的RNAi细胞模型,为进一步研究E7蛋白的作用及致癌机制奠定了重要的物质基础。
The establishment of RNAi cell model of HPV16-E7 gene can provide material prerequisites for further study on the role of HPV16-E7 protein and oncogenic mechanism. The HPV16-E7 gene-specific siRNA fragment was selected to construct a lentiviral siRNA recombinant expression vector. The recombinant virus was transfected by the 293FT virus packaging cell and infected with HPV16-positive SiHa cervical cancer cells, screening of antibiotics and identification of molecular biology, and established RNAi cell model stably expressing HPV16-E7-siRNA. The cell model, the efficiency of inhibition of expression of the target gene (E7), was also confirmed by Western blotting and RT-PCR. The results showed that a stable, effective and viable RNAi cell model could be established by using lentiviral vector and siRNA specific for HPV16-E7 gene, which laid an important material foundation for further study on the role of E7 protein and carcinogenesis.
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