【摘 要】
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目的 建立一种灵敏特异且简便易行的乙型肝炎病毒(HBV)B基因Ba和Bj亚型分型方法.方法 用DNAStar软件比较分析GenBank中登录的B基因型HBV(HBV/B)和C基因型HBV(HBV/C)的基因序
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目的 建立一种灵敏特异且简便易行的乙型肝炎病毒(HBV)B基因Ba和Bj亚型分型方法.方法 用DNAStar软件比较分析GenBank中登录的B基因型HBV(HBV/B)和C基因型HBV(HBV/C)的基因序列,分别设计出HBV/B型特异性引物HB及Ba和Bj基因亚型特异性引物BA和BJ.第一轮PCR反应以HBV/B型特异性引物HB作为上游引物,以日本学者Sugauchi等设计的引物HBAS-4V作为下游引物(外引物);第二轮PCR反应同样以HB作为上游引物,亚型特异性引物BA和BJ作为下游引物(内引物),在同一个反应管中进行.根据PCR产物片段的大小判定B基因亚型.随机选取实验室内经型特异性引物PCR法鉴定为HBV/B(56份)及经preS/S区序列测定证实为HBV/C(15份)的HBV慢性感染者血清标本共71份,以研究设计的引物进行半巢式PCR反应,检测Ba和Bj基因亚型,并以载有HBV Bj亚型基因组的质粒作为Bj亚型的阳性对照.然后随机选取15份B型样本的第一轮PCR产物直接测序,利用Blast和DNAStar软件将测序结果与GenBank中登录的Ba及Bj亚型序列进行同源性分析,验证该半巢式PCR法的准确性.结果 56份HBV/B血清标本经该半巢式PCR法检测,均为Ba亚型,随机选取的15份B型PCR产物直接测序,结果均为Ba亚型,与研究中应用的半巢式PCR方法检测结果一致.15份HBV/C的血清标本检测结果均为阴性.结论 建立了HBV Ba和Bj亚型半巢式PCR法.该方法灵敏、特异、简便、易行,可用于临床和流行病学大样本检测.
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