探讨质膜型唾液酸酶(NEU3)活性对骨肉瘤MG-63细胞在体外增殖及凋亡的调控作用。
方法体外培养MG-63细胞，以抗NEU3抗体免疫荧光染色，显示NEU3在MG-63细胞中的定位；以0 nmol/L唾液酸酶活性抑制剂(DANA)处理组或0 μg/ml抗NEU3抗体处理组为空白对照组，以10、20、50 nmol/L DANA或0.5、1.0、2.0 μg/ml抗NEU3抗体处理24 h或48 h后，采用CCK-8比色法、流式细胞术分别检测细胞增殖抑制率和细胞凋亡率，Western blotting法检测癌基因相关蛋白Ras蛋白和Bcl-2蛋白的表达水平。
结果免疫荧光染色结果显示，NEU3表达定位于MG-63细胞质中。作用48 h后，0、10、20、50 nmol/L DANA处理组细胞增殖抑制率分别为0、15.10%±3.23%、41.46%±2.31%、64.68%±4.12%，差异具有统计学意义(F＝99.90，P<0.001)，不同DANA浓度组间两两比较，差异均具有统计学意义(均P<0.05)；0、0.5、1.0、2.0 μg/ml抗NEU3抗体封闭处理48 h后，MG-63细胞增殖抑制率分别为0、9.34%±1.53%、19.66%±4.18%、42.50%±5.68%，差异具有统计学意义(F＝25.67，P<0.001)，不同抗体浓度组间两两比较，除0.5 μg/ml与1.0 μg/ml组比较差异无统计学意义外(P>0.05)，其余组间差异均具有统计学意义(均P<0.05)。采用不同浓度DANA(0、10、20、50 nmol/L)处理MG-63细胞24 h后，凋亡率分别为4.05%±0.07%、4.15%±0.23%、12.85%±1.48%、8.29%±0.86%，组间差异具有统计学意义(F＝23.21，P<0.001)，不同DANA浓度组间两两比较，除0 nmol/L与10 nmol/L、20 nmol/L与50 nmol/L处理组间差异无统计学意义外(P>0.05)，其余组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)；以不同浓度NEU3抗体(0、0.5、1.0、2.0 μg/ml)处理MG-63细胞24 h后，细胞凋亡率分别为4.05%±0.07%、20.13%±2.97%、20.29%±2.82%、20.58%±0.70%，组间差异有统计学意义(F＝15.36，P＝0.001)，不同抗体浓度组间两两比较，0 μg/ml与各处理组间差异有统计学意义(均P<0.05)，而各处理组间差异无统计学意义(P>0.05)。Western blotting结果显示随DANA和NEU3抗体浓度升高，Bcl-2蛋白和Ras蛋白的表达逐渐降低。
结论抑制NEU3酶活性可抑制骨肉瘤细胞MG-63的存活，促进该细胞的凋亡，其作用机制可能是通过下调癌基因相关蛋白Ras和Bcl-2的表达实现的，提示NEU3可能是治疗骨肉瘤的潜在药物靶点。