【摘 要】
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本研究旨在优化从微量卵中克隆基因的条件,并构建牛H1foo基因真核表达载体。首先将微量（1~5个）卵母细胞裂解后,用改进的RT-PCR方法扩增内参β-actin基因以检测该方法扩增基因的
【机 构】
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西北农林科技大学动物医学院陕西省干细胞工程技术研究中心陕西省农业分子生物学重点实验室
【基金项目】
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2007年西北农林科技大学留学回国人员科研启动经费（Z111020723）
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本研究旨在优化从微量卵中克隆基因的条件,并构建牛H1foo基因真核表达载体。首先将微量（1~5个）卵母细胞裂解后,用改进的RT-PCR方法扩增内参β-actin基因以检测该方法扩增基因的效率,结果表明单卵扩增成功率为80%以上（10/12）,3个、5个卵扩增成功率均达100%。利用该体系从微量（5个）牛卵中克隆得到H1fooCDS全长序列,测序结果显示其与GenBank上公布序列同源性为100%。将牛H1fooCDS连接至pMD19-T载体上,经酶切、测序鉴定正确后定向亚克隆到真核表达载体pVenus上,
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