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利用超高效液相-质谱联用技术 (UPLC-MS) 对红三叶草乙醇提取物中化学成分进行分析鉴定，以环氧合酶-2作为生物靶分子，运用超滤质谱技术以“受体-配体”亲和及超滤法作为分析方法筛选具有酶抑制，共鉴定出7个活性化学成分，分别为大豆苷、芒柄花苷、大豆苷元、印度黄檀苷、芒柄花素、德鸢尾素、鹰嘴豆芽素A。利用半制备型高效液相色谱（Semi-preparative HPLC）和高速逆流色谱（High-speed counter-current chromatography，HSCCC）技术对环氧合酶-2抑制剂进行分离和纯化，7种成分纯化至> 80%，其中6种成分> 92％。结果表明采用超滤质谱-半制备液相色谱-高速逆流色谱联用技术可以快速鉴定、筛选和纯化红三叶草中环氧合酶-2抑制剂。为天然药物的开发提供了理论基础和技术平台，可推广应用于其他酶抑制剂的鉴定和分离。