miR-599表达变化对卵巢癌细胞增殖侵袭能力的影响

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目的:探讨微小RNA(miRNA,miR)-599在卵巢癌中的表达及其对卵巢癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测miR-599在36例卵巢癌及癌旁组织、卵巢癌细胞株及正常卵巢上皮细胞中的表达。将miR-599抑制物(实验组)和阴性对照miR-NC(对照组)分别转染至卵巢癌细胞株A2780,qPCR检测转染效率。利用生物信息学技术预测筛选miR-599的候选靶基因,建立双荧光素酶报告基因分析系统,验证miR-599对候选靶基因的直接靶定作用。qPCR和Western blot检测靶基因的mRNA和相关蛋白表达变化。细胞计数法(CCK-8)和Transwell侵袭实验分别检测miR-599对A2780细胞增殖和侵袭能力的影响。结果:qPCR结果显示,卵巢癌组织miR-599表达水平高于癌旁组织(n P<0.01)。卵巢癌细胞株miR-599表达水平高于正常卵巢上皮细胞(n P<0.05)。阿片样物质结合蛋白(OPCML)是miR-599的候选靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实miR-599可直接靶定OPCML基因的3′-非翻译区(3′-UTR)(n P<0.01)。下调miR-599表达后,A2780细胞OPCML的mRNA和蛋白表达水平降低(n P<0.01),细胞周期调控蛋白如CDK4和Cyclin D2的表达降低;细胞侵袭负向调控蛋白E-cadherin蛋白表达升高,正向调控蛋白N-cadherin表达降低,A2780细胞增殖及侵袭能力均降低(n P<0.05)。n 结论:miR-599在卵巢癌组织和细胞株中高表达,下调卵巢癌细胞A2780中的miR-599表达可通过升高OPCML基因表达抑制卵巢癌细胞增殖和侵袭能力。“,”Objective:To investigate the expression of microRNA (miR)-599 in ovarian cancer and its effect on the proliferation and invasion of ovarian cancer cells.Methods:Quantitative real-time quantitative polymerase chain reaction (qPCR) was used to detect the expression of miR-599 in 36 cases of ovarian carcinoma and paracancerous tissues, ovarian cancer cell lines and normal ovarian epithelial cells. The miR-599 inhibitor (experimental group) and the negative control miR-NC (control group) were transfected into the ovarian cancer cell line A2780, respectively. qPCR was used to detect the transfection efficiency. Bioinformatics technology was used to predict and screen candidate target genes of miR-599, and dual luciferase reporter gene analysis system was established to verify the direct targeting effect of miR-599 on candidate target genes. qPCR and Western blot were used to detect the mRNA and protein expression changes of target genes. Cell counting (CCK-8) and transwell invasion assays were used to detect the effect of miR-599 on proliferation and invasion of A2780 cells.Results:qPCR results showed that the expression of miR-599 in ovarian cancer tissues was higher than that in paracancerous tissues (n P<0.01). The expression level of miR-599 in ovarian cancer cells was higher than that in normal ovarian epithelial cells (n P<0.05). The opioid binding protein (OPCML) is a candidate target gene for miR-599. The dual luciferase reporter assay confirmed that miR-599 can directly target the 3′-untranslated region (3′-UTR) of the OPCML gene (n P<0.01). After down-regulation of miR-599 expression, the mRNA and protein expression levels of OPCML in A2780 cells decreased (n P<0.01); the expression of cell cycle regulatory proteins such as CDK4 and cyclin D2 was decreased; the expression of negative regulatory protein E-cadherin was increased, and the expression of positive regulatory protein N-cadherin was decreased; the proliferation and the invasion ability of A2780 cells decreased (n P<0.05).n Conclusions:miR-599 is highly expressed in ovarian cancer tissues and cell lines. Down-regulation of miR-599 expression in ovarian cancer cells A2780 can inhibit the proliferation and invasion of ovarian cancer cells by increasing OPCML gene expression.
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