【摘 要】
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目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)标准株(Hp P12)和其毒力因子VacA对人胃黏膜上皮细胞(GES-1)DNA损伤和同源重组(homologous recombination，HR)修复的影响。方法应用Hp P12和其vacA基因敲除株(Hp P12 ΔvacA)以感染复数(multiplicity of infection，MOI)＝100分别感染
【机 构】
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郑州大学第五附属医院消化内科，郑州大学马歇尔医学研究中心，河南省幽门螺杆菌及微生态与消化道肿瘤重点实验室 450052,郑州大学第五附属医院消化内科，郑州大学马歇尔医学研究中心，河南省幽门螺杆菌及微生
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目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，H.pylori)标准株(Hp P12)和其毒力因子VacA对人胃黏膜上皮细胞(GES-1)DNA损伤和同源重组(homologous recombination，HR)修复的影响。
方法应用Hp P12和其vacA基因敲除株(Hp P12 ΔvacA)以感染复数(multiplicity of infection，MOI)＝100分别感染GES-1细胞，采用依托泊苷(50 μmol/L)或丝裂霉素(0.5 μg/ml)处理2 h的GES-1细胞作为阳性对照，Western blot和免疫荧光方法检测DNA损伤标记蛋白γH2AX、HR修复关键蛋白(Rad51、pMRE11、CtIP和pCtIP)的表达水平以及在DNA损伤位点的募集情况；进一步采用Hp P12和Hp P12 ΔvacA菌株感染人胚肾HEK-293(DR-GFP)细胞系，验证VacA蛋白对HR修复的影响。
结果DNA损伤标记蛋白γH2AX的表达和募集，在Hp P12感染组较未感染组上调(P<0.05)，在Hp P12 ΔvacA感染组较标准株感染组下调(P<0.05)。同样，HR修复关键蛋白(Rad51、pMRE11、CtIP和pCtIP)的表达和募集，在Hp P12标准株感染组较未感染组上调(P<0.05)，在Hp P12 ΔvacA感染细胞中较标准株下调(P<0.05)。进一步采用上述菌株感染I-SceⅠ质粒转染的HEK-293(DR-GFP)细胞进行验证，发现Hp P12感染组绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞数下调，而Hp P12 ΔvacA感染组下调更加明显(P<0.05)。
结论Hp P12标准株感染胃上皮GES-1细胞后引起DNA损伤，促进了GES-1细胞中的HR修复，其中VacA毒力因子起到促进HR修复的重要作用。
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