【摘 要】
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采用PCR方法,以83912（含K99）标准株菌液为模板扩增K99菌毛基因,克隆至pBS-T载体。提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。经测序正确后,构建原核表达载体pET-28a-K99,将重组质粒转入
【机 构】
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新疆石河子大学动物科技学院,新疆地方与民族高发病重点实验室
【基金项目】
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新疆生产建设兵团博士基金（兵博02）（NKBOISHZO8）.
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采用PCR方法,以83912（含K99）标准株菌液为模板扩增K99菌毛基因,克隆至pBS-T载体。提取阳性质粒,进行PCR和酶切鉴定。经测序正确后,构建原核表达载体pET-28a-K99,将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中,经IPTG诱导表达后,菌体蛋白经SDS-PAGE,在约18Ku有一明显特异性条带,表达产物经初步纯化后,免疫印迹法（Western blotting）分析证实,此重组蛋白与K99阳性血清发生特异性反应。然后将初步纯化的重组蛋白免疫实验兔,并设对照组,建立间接ELISA法进行抗体
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