【摘 要】
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【背景和目的】尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）可引起烟草镰刀菌根腐病（Fusarium root rot of tobacco），为明确病原菌致病相关基因。【方法】以烟草强致病性尖孢镰刀菌菌株B-9-1的分生孢子为受体，利用携带潮霉素B（hygromycin B,hyg）质粒的根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导转化，获得能够稳定表达绿色荧光蛋白（
【机 构】
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河南省农业科学院烟草研究所黄淮烟区烟草病虫害绿色防控重点实验室
【基金项目】
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河南省农业科学院基础性科研工作项目“烟草尖孢镰刀菌致病相关基因的筛选与功能研究”（2021ZC25）;河南省农业科学院优秀青年科技基金计划项目“烟草茄病镰刀菌复合群系统发育与致病特性研究”（2022YQ09）;河南省农业科学院科技创新团队“烟草主要病虫害绿色防控关键技术研究与应用”（2022TD26）； 河南省烟草公司科技项目“烟草根腐病害发生的微生物群落分析
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【背景和目的】尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）可引起烟草镰刀菌根腐病（Fusarium root rot of tobacco），为明确病原菌致病相关基因。【方法】以烟草强致病性尖孢镰刀菌菌株B-9-1的分生孢子为受体，利用携带潮霉素B（hygromycin B,hyg）质粒的根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）介导转化，获得能够稳定表达绿色荧光蛋白（green fluorescent protein, GFP）的尖孢镰刀菌转化菌株，构建烟草尖孢镰刀菌遗传转化体系。【结果】（1）尖孢镰刀菌的最优转化体系为：潮霉素B最适质量浓度50μg/mL，在25℃条件下，以1 cm宽的条形硝酸纤维膜为载体，将携带有pCAM-GFP-hyg质粒的根癌农杆菌摇菌培养至OD600=0.7，与震荡培养24 h获得的浓度为106个/mL的尖孢镰刀菌分生孢子悬浮液在含有200μmol/L乙酰丁香酮的共培养基上共培养48 h。（2）转化子继代培养、PCR检测和荧光显微观察结果表明外源GFP基因成功整合到烟草尖孢镰刀菌基因组中并可以进行稳定遗传表达。（3）Sourthernblot分析结果进一步证明T-DNA成功整合到尖孢镰刀菌基因组中，且60%以上为单拷贝插入。【结论】本研究成功构建了根癌农杆菌介导的烟草尖孢镰刀菌遗传转化体系，为烟草尖孢镰刀菌基因功能及病原菌的致病机制研究提供基础。
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