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目的
采用不同方法转染原代人外周血淋巴细胞，以寻找一种简便、高效的淋巴细胞转染方法。
方法采用聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)分离法从健康人外周血中分离出单个核细胞，锥虫蓝检测细胞存活率。单个核细胞在6孔板内培养2 h后吸出悬浮的淋巴细胞至24孔板中继续培养。分别采用电穿孔介导载体质粒(PEGFP-N1)转染活化的淋巴细胞、慢病毒(LVGFP)单次感染及慢病毒重复感染方法分别转染静息或活化的淋巴细胞，在荧光显微镜下观察感染后不同时间点细胞绿色荧光蛋白(GFP)表达情况，同时收集细胞用流式细胞术检测GFP阳性细胞的比例，比较不同条件下慢病毒感染淋巴细胞的效率。
结果通过Ficoll-Hypaque分离的单个核细胞的纯度可达95 %，其活细胞率> 95 %，获得的淋巴细胞占90%～95%，形态较均一。"2 100 V、10 ms、1个脉冲"电穿孔淋巴细胞后可见散在荧光，但随着时间推移荧光逐渐减弱，72 h基本看不到荧光。慢病毒单次感染静息期淋巴细胞48 h后无绿色荧光，流式细胞术检测GFP阳性细胞<1 %。慢病毒单次感染增殖期淋巴细胞可见绿色荧光，且随着病毒浓度增大，荧光逐渐增强，GFP阳性细胞在1％～5％之间。慢病毒重复感染增殖期淋巴细胞可见较强绿色荧光，GFP阳性细胞在5 %～10％左右，随着时间推移荧光逐渐增强。
结论慢病毒重复感染增殖期淋巴细胞，能有效地将外源基因导入淋巴细胞内稳定表达。