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[摘 要] 目的：观察在非小细胞肺癌组织（NSCLC）及癌旁正常组织中两种基因RUNX3和P53的表达情况，对两者在非小细胞肺癌组织中的表达情况进行相关分析，研究它们与临床病理分期的关系，探讨这两种基因与非小细胞肺癌之间发生、发展的关联。方法：采用免疫组化法（SP法）检测在40例非小细胞肺癌和10例肺癌旁正常组织中两种基因RUNX3和P53的表达情况。结果：（1）在非小细胞肺癌组织中RUNX3基因的阳性表达（37.5%，15/40）明显低于在癌旁正常组织中的表达（80%，8/10）（P<0.05）;非小细胞肺癌组织中P53基因的阳性表达（65%，26/40）明显高于其在癌旁正常组织中的情况（20%，2/10）（P<0.05）。（2）在非小细胞肺癌中RUNX3和P53基因的表达均与患者的年龄、性别因素无关（P>0.05），均与肺癌组织的不同分期有关（P<0.05）。结论：RUNX3基因表达下调与P53基因表达可能与非小细胞肺癌的发生、发展有关，RUNX3和P53基因有助于非小细胞肺癌的诊断和治疗。
[关 键 词] 非小细胞肺癌;RUNX3基因;P53基因;免疫组织化学
[中图分类号] R4 [文献标志码] A [文章编号] 2096-0603（2021）38-0084-02
在呼吸系统疾病中，肺癌是一种常见的恶性肿瘤，临床上可分为两个大类，即小细胞肺癌和非小细胞肺癌，这当中以非小细胞肺癌（Non-small-cell carcinoma，NSCLC）占比居多，主要包括腺癌、鳞癌、大细胞肺癌等。在现阶段，大部分NSCLC患者的生存率并不高，主要是因为在明确诊断时已为晚期或已出现远处转移。因此，如何能早期发现肿瘤并为肿瘤患者的治疗提供新方向值得我们进行深入研究。
检测肿瘤基因是目前人们通过分子标记物了解肿瘤的一种方式，主要是通过分析研究基因在肿瘤进展过程中的作用及其与肿瘤不同分期的关系等因素来完成，这也为今后开展基因治疗提供可能性。
P53基因最早是由英国科学家发现的，常被称为基因卫士或基因监护者。由于P53基因能够激活修复或是停止损伤细胞生长，近年来的相关研究较多。P53基因包括11个外显子和10个内含子，在17号染色体短臂上定位。目前有研究发现，P53基因与部分肿瘤的发生、发展有着一定的密切关系。
人类runt相关转录因子3（human runt-related trans-cription factor 3，RUNX3） 位于染色體lp36，全长为67kb，含有两个启动和6个外显子，属于抑癌基因。有相关研究表明，RUNX3基因可能为通过影响转化生长因子β（Transforming growth factor beta，TGF-β）信号通路的传导，进而在细胞周期调控、凋亡等方面发挥作用。
为帮助判断在非小细胞肺癌中RUNX3和P53两种基因的表达情况，分别选取非小细胞肺癌标本组织和癌旁正常标本组织利用SP法开展相关实验，进而掌握它们在肺癌病变中的变化。
一、所用材料与实验方法
（一）实验标本的来源
收集经外科手术切除的非小细胞肺癌石蜡标本，已经过病理证实为原发性非小细胞肺癌共40例，包括28例男性、12例女性，平均年龄约为55岁。所有患者术前都没有接受过放射治疗或者化学药物治疗等治疗。
（二）试剂与方法
按照设计的技术路线，购买RUNX3抗体、P53抗体及其他实验材料后，依照相关产品说明书进行所有操作步骤，在每组试验中以磷酸盐（PBS）缓冲液作为阴性对照代替一抗。
（三）结果判定
利用光学显微镜观察切片情况，主要在细胞质和（或）细胞核内出现RUNX3基因阳性染色，主要在细胞核内有P53基因阳性染色，两种基因的阳性染色均为棕黄色或棕褐色颗粒状或团块。
判断标准：随机选取5个视野，在高倍镜下，在每个视野内计算100个细胞，按照着色细胞数与计数细胞数之比计算，取其平均值，确定为百分比<30%为阴性（-），百分比≥30%为阳性（+）。
（四）统计学分析
所有数据在输入电脑后，使用统计学软件SPSS 19.0进行数据分析和数据处理，P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
（一）RUNX3、P53两种基因在非小细胞肺癌组织与癌旁正常组织中阳性表达情况
经过分析，RUNX3、P53两种基因在对照组和非小细胞肺癌之间的差异有统计学意义（P<0.05）。RUNX3基因在非小细胞肺癌组织中的阳性表达（37.5%，15/40）明显低于癌旁组织（80%，8/10），P53基因在非小细胞肺癌组织中的阳性表达（65%，26/40）明显高于癌旁组织（20%，2/10）。
（二）RUNX3、P53两种基因的表达与临床病理分期的关系
非小细胞肺癌组织中RUNX3基因、P53两种基因的表达与患者的年龄、性别差异均无统计学意义（P>0.05），差异在肿瘤的不同分期存在统计学意义（P<0.05），RU-NX3基因阳性率随肿瘤临床分期的升高而降低，随肿瘤临床分期的升高P53基因阳性表达增加。 三、讨论
肺癌是我国常见的恶性肿瘤，每年死于肺癌的人多达60万，发病率和死亡率居于前列，占全部癌类发病率的9.2%～10.6%。通过基因研究有助于我们加深对肿瘤的认识和了解，也有助于找到治疗肿瘤的新方向。
（一）RUNX3基因在肺癌的表达及意义
在多种肿瘤疾病中，目前有研究表明RUNX3基因均出现表达下调的情况。通过这次实验，RUNX3基因的阳性表达在非小细胞肺癌组织中明显低于癌旁正常肺组织中的表达，这说明RUNX3基因可能与非小细胞肺癌的发生有关，这也与之前在膀胱癌的研究结果是相一致的，与贾光辉等对66例结直肠癌手术标本的研究结果一致。RUNX3基因在不同分期肺癌中的表达差异，也说明RUNX3基因可能与肺癌细胞的分化有关，这与张乐等对65例非小细胞肺癌患者的检测结果相一致。因此，RUNX3基因可入选为对肺癌早期诊断及预后评估一个非常有价值的参考指标。有学者研究认为，RUNX3基因表达下调可能是由于肺癌中RUNX3基因发生甲基化，这一情况在贾光辉等对59例结直肠癌组织的研究中出现。
（二）P53基因在非小细胞肺癌的表达及意义
通过此次数据分析，可以发现标本组织中P53基因的阳性表达情况明显高于癌旁正常组织的表达，在肿瘤的不同病理分期也有一定差异，这也与杨春梅等对104例NSCLC患者的临床资料进行回顾性分析的相关研究结果一致。有报道指出，这可能是由于P53基因突变失去抑癌基因功能引起的。因此，检测P53基因的表达水平，可能有助于判断非小细胞肺癌的病理发展变化。
总体来说，肿瘤的发生有可能是RUNX3发生甲基化及P53发生突变而导致，对患者检测RUNX3和P53两种基因可能可以为非小细胞肺癌的早期发现提供依据，而这两种基因也可以考虑设定为非小细胞肺癌基因治疗的一个新参考靶点。此次研究由于实验的标本数量有限，可能会使结果产生一定的偏倚，所以，在后期研究还可以通过增加样本数量来进一步证实RUNX3和P53基因在非小细胞肺癌中的临床应用价值。
参考文献：
[1]Labbé Catherine，et al. Prognostic and predictive effects of TP53 co-mutation in patients with EGFRmut-ated non-small cell lung cancer（NSCLC）[J].Lung cancer （Amsterdam，Netherlands），2017（111）：23-29.
[2]Eriksson Sofi E，et al.P53 as a hub in cellular redox regulation and therapeutic target in cancer[J].Narnia 2019，
11（4）：330-341.
[3]Ten Kate，Fiebo J C，et al. Pattern of P53 protein expression is predictive for survival in chemoradiotherapy-naive esophageal adenocarcinoma[J].Oncotarget，2017，8（61）：104123-104135.
[4]孙辉荣.血清P53抗体异常高水平对消化道肿瘤的早期诊断价值分析[J].中国现代普通外科进展，2021， 24（2）：104-106，111.
[5]贾光辉.Runx3和C-myc在结直肠癌组织中的表达及其临床意义分析[J].临床医药文献电子杂志，2020， 7（15）：3-4.
[6]王磊.5-氮-2-脱氧胞苷对人膀胱癌细胞株5637细胞生长及RUNX3基因甲基化的影响[J].人人健康，2019（15）：197-198.
[7]杨春梅，贺建清，杨明金，等.P53和TRIM29基因在非小细胞肺癌中的表达及其在临床病理诊断中的意义[J].解放军医药杂志，2019，31（5）：22-25.
[8]賈光辉，郭民.RUNX3基因甲基化在结直肠癌发生中作用及与预后的关系研究[J].中国医药科学，2019，9（9）：12-15.
[9]张乐.非小细胞肺癌组织中抑癌基因RUNX3启动子甲基化与肿瘤侵袭相关基因E-Cad、MMP-7和TIMP-1蛋白表达的关系[J].中国免疫学杂志，2019，35（3）：316-319，324.
[10]王磊.RUNX3和Ki67基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义[J].亚太传统医药，2013，9（9）：12-13.
◎编辑 司 楠
[关 键 词] 非小细胞肺癌;RUNX3基因;P53基因;免疫组织化学
[中图分类号] R4 [文献标志码] A [文章编号] 2096-0603（2021）38-0084-02
在呼吸系统疾病中，肺癌是一种常见的恶性肿瘤，临床上可分为两个大类，即小细胞肺癌和非小细胞肺癌，这当中以非小细胞肺癌（Non-small-cell carcinoma，NSCLC）占比居多，主要包括腺癌、鳞癌、大细胞肺癌等。在现阶段，大部分NSCLC患者的生存率并不高，主要是因为在明确诊断时已为晚期或已出现远处转移。因此，如何能早期发现肿瘤并为肿瘤患者的治疗提供新方向值得我们进行深入研究。
检测肿瘤基因是目前人们通过分子标记物了解肿瘤的一种方式，主要是通过分析研究基因在肿瘤进展过程中的作用及其与肿瘤不同分期的关系等因素来完成，这也为今后开展基因治疗提供可能性。
P53基因最早是由英国科学家发现的，常被称为基因卫士或基因监护者。由于P53基因能够激活修复或是停止损伤细胞生长，近年来的相关研究较多。P53基因包括11个外显子和10个内含子，在17号染色体短臂上定位。目前有研究发现，P53基因与部分肿瘤的发生、发展有着一定的密切关系。
人类runt相关转录因子3（human runt-related trans-cription factor 3，RUNX3） 位于染色體lp36，全长为67kb，含有两个启动和6个外显子，属于抑癌基因。有相关研究表明，RUNX3基因可能为通过影响转化生长因子β（Transforming growth factor beta，TGF-β）信号通路的传导，进而在细胞周期调控、凋亡等方面发挥作用。
为帮助判断在非小细胞肺癌中RUNX3和P53两种基因的表达情况，分别选取非小细胞肺癌标本组织和癌旁正常标本组织利用SP法开展相关实验，进而掌握它们在肺癌病变中的变化。
一、所用材料与实验方法
（一）实验标本的来源
收集经外科手术切除的非小细胞肺癌石蜡标本，已经过病理证实为原发性非小细胞肺癌共40例，包括28例男性、12例女性，平均年龄约为55岁。所有患者术前都没有接受过放射治疗或者化学药物治疗等治疗。
（二）试剂与方法
按照设计的技术路线，购买RUNX3抗体、P53抗体及其他实验材料后，依照相关产品说明书进行所有操作步骤，在每组试验中以磷酸盐（PBS）缓冲液作为阴性对照代替一抗。
（三）结果判定
利用光学显微镜观察切片情况，主要在细胞质和（或）细胞核内出现RUNX3基因阳性染色，主要在细胞核内有P53基因阳性染色，两种基因的阳性染色均为棕黄色或棕褐色颗粒状或团块。
判断标准：随机选取5个视野，在高倍镜下，在每个视野内计算100个细胞，按照着色细胞数与计数细胞数之比计算，取其平均值，确定为百分比<30%为阴性（-），百分比≥30%为阳性（+）。
（四）统计学分析
所有数据在输入电脑后，使用统计学软件SPSS 19.0进行数据分析和数据处理，P<0.05为差异有统计学意义。
二、结果
（一）RUNX3、P53两种基因在非小细胞肺癌组织与癌旁正常组织中阳性表达情况
经过分析，RUNX3、P53两种基因在对照组和非小细胞肺癌之间的差异有统计学意义（P<0.05）。RUNX3基因在非小细胞肺癌组织中的阳性表达（37.5%，15/40）明显低于癌旁组织（80%，8/10），P53基因在非小细胞肺癌组织中的阳性表达（65%，26/40）明显高于癌旁组织（20%，2/10）。
（二）RUNX3、P53两种基因的表达与临床病理分期的关系
非小细胞肺癌组织中RUNX3基因、P53两种基因的表达与患者的年龄、性别差异均无统计学意义（P>0.05），差异在肿瘤的不同分期存在统计学意义（P<0.05），RU-NX3基因阳性率随肿瘤临床分期的升高而降低，随肿瘤临床分期的升高P53基因阳性表达增加。 三、讨论
肺癌是我国常见的恶性肿瘤，每年死于肺癌的人多达60万，发病率和死亡率居于前列，占全部癌类发病率的9.2%～10.6%。通过基因研究有助于我们加深对肿瘤的认识和了解，也有助于找到治疗肿瘤的新方向。
（一）RUNX3基因在肺癌的表达及意义
在多种肿瘤疾病中，目前有研究表明RUNX3基因均出现表达下调的情况。通过这次实验，RUNX3基因的阳性表达在非小细胞肺癌组织中明显低于癌旁正常肺组织中的表达，这说明RUNX3基因可能与非小细胞肺癌的发生有关，这也与之前在膀胱癌的研究结果是相一致的，与贾光辉等对66例结直肠癌手术标本的研究结果一致。RUNX3基因在不同分期肺癌中的表达差异，也说明RUNX3基因可能与肺癌细胞的分化有关，这与张乐等对65例非小细胞肺癌患者的检测结果相一致。因此，RUNX3基因可入选为对肺癌早期诊断及预后评估一个非常有价值的参考指标。有学者研究认为，RUNX3基因表达下调可能是由于肺癌中RUNX3基因发生甲基化，这一情况在贾光辉等对59例结直肠癌组织的研究中出现。
（二）P53基因在非小细胞肺癌的表达及意义
通过此次数据分析，可以发现标本组织中P53基因的阳性表达情况明显高于癌旁正常组织的表达，在肿瘤的不同病理分期也有一定差异，这也与杨春梅等对104例NSCLC患者的临床资料进行回顾性分析的相关研究结果一致。有报道指出，这可能是由于P53基因突变失去抑癌基因功能引起的。因此，检测P53基因的表达水平，可能有助于判断非小细胞肺癌的病理发展变化。
总体来说，肿瘤的发生有可能是RUNX3发生甲基化及P53发生突变而导致，对患者检测RUNX3和P53两种基因可能可以为非小细胞肺癌的早期发现提供依据，而这两种基因也可以考虑设定为非小细胞肺癌基因治疗的一个新参考靶点。此次研究由于实验的标本数量有限，可能会使结果产生一定的偏倚，所以，在后期研究还可以通过增加样本数量来进一步证实RUNX3和P53基因在非小细胞肺癌中的临床应用价值。
参考文献：
[1]Labbé Catherine，et al. Prognostic and predictive effects of TP53 co-mutation in patients with EGFRmut-ated non-small cell lung cancer（NSCLC）[J].Lung cancer （Amsterdam，Netherlands），2017（111）：23-29.
[2]Eriksson Sofi E，et al.P53 as a hub in cellular redox regulation and therapeutic target in cancer[J].Narnia 2019，
11（4）：330-341.
[3]Ten Kate，Fiebo J C，et al. Pattern of P53 protein expression is predictive for survival in chemoradiotherapy-naive esophageal adenocarcinoma[J].Oncotarget，2017，8（61）：104123-104135.
[4]孙辉荣.血清P53抗体异常高水平对消化道肿瘤的早期诊断价值分析[J].中国现代普通外科进展，2021， 24（2）：104-106，111.
[5]贾光辉.Runx3和C-myc在结直肠癌组织中的表达及其临床意义分析[J].临床医药文献电子杂志，2020， 7（15）：3-4.
[6]王磊.5-氮-2-脱氧胞苷对人膀胱癌细胞株5637细胞生长及RUNX3基因甲基化的影响[J].人人健康，2019（15）：197-198.
[7]杨春梅，贺建清，杨明金，等.P53和TRIM29基因在非小细胞肺癌中的表达及其在临床病理诊断中的意义[J].解放军医药杂志，2019，31（5）：22-25.
[8]賈光辉，郭民.RUNX3基因甲基化在结直肠癌发生中作用及与预后的关系研究[J].中国医药科学，2019，9（9）：12-15.
[9]张乐.非小细胞肺癌组织中抑癌基因RUNX3启动子甲基化与肿瘤侵袭相关基因E-Cad、MMP-7和TIMP-1蛋白表达的关系[J].中国免疫学杂志，2019，35（3）：316-319，324.
[10]王磊.RUNX3和Ki67基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义[J].亚太传统医药，2013，9（9）：12-13.
◎编辑 司 楠