【摘 要】
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为了获得猪白细胞介素6(IL6)和α干扰素(IFNα)双重活性的融合蛋白,研究其作为免疫佐剂的可行性,利用IL6和IFNα基因的编码区序列以及原核表达载体pET32a序列,设计了带有限制
【机 构】
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云南农业职业技术学院畜牧兽医系,云南大学生命科学学院,云南农业大学动物科学技术学院,云南农业大学农科专业基础实验教学示范中心
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为了获得猪白细胞介素6(IL6)和α干扰素(IFNα)双重活性的融合蛋白,研究其作为免疫佐剂的可行性,利用IL6和IFNα基因的编码区序列以及原核表达载体pET32a序列,设计了带有限制性内切酶位点、Linker序列以及His标签的特异性引物扩增出猪IL6和IFNα的成熟肽基因序列,并分别与克隆载体pMD18连接后转化Escherichiα coli DH5α,提取质粒酶切并连接构建重组质粒pMD 18-IL6-IFNα.将该重组质粒和表达载体pET32a同时酶切并连接构建pET32-IL6-IFNα重组质粒,依次转化E.coli DH5α和E.coli Rosetta (DE3)感受态细胞,并经不同终浓度的IPTG以及不同时间的诱导表达.结果成功构建了IL6和IFNα的融合表达载体,SDS-PAGE检测pET32-IL6-IFNα融合蛋白在E.coli Rosetta (DE3)中得到了较高表达,且经1.00 mmol/L IPTG诱导7.0h后表达量最大,目的蛋白的相对分子量为44 960,与理论预期值一致.SDS-PAGE检测显示融合蛋白主要以不溶性的包涵体形式存在.
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