目的 分析无锡市区2019年9月-2021年8月出生的5562例新生儿耳聋相关基因GJB2、SLC26A4、GJB3、线粒体12S rRNA突变情况。方法 以无锡市区2019年9月-2021年8月出生的5 562例新生儿为研究对象，收集足跟血，采用荧光PCR熔解曲线法及Sanger测序检测耳聋相关基因GJB2、SLC26A4、GJB3及线粒体12S rRNA基因。结果 5 562例新生儿中存在耳聋基因突变336例（6.04%,336/5 562），其中GJB2基因突变158例（2.84%,158/5 562）、SLC26A4基因突变127例（2.28%,127/5 562）、GJB3基因突变29例（0.52%,29/5 562）、线粒体12S rRNA基因突变18例（0.32%,18/5 562）、复合GJB2和SLC26A4基因突变4例（0.07%,4/5 562）。通过听力筛查的5 437例新生儿中317例存在耳聋基因突变，突变基因包括GJB2（146例）、SLC26A4（120例）、GJB3（29例）、线粒体12S rRNA（18例）、复合GJB2和SLC26A4基因（4例）；未通过听力筛查的125例中存在耳聋基因突变19例，突变基因包括GJB2（12例）、SLC26A4（7例）。GJB2基因突变位点主要有c. 235delC、c. 299＿300delAT及c. 176＿191del16等；SLC26A4基因突变位点主要有c. 919-2A＞G、c. 2168A＞G及c. 1226G＞A等；GJB3基因突变位点包括c. 538C＞T、c. 547G＞A；线粒体12S rRNA基因突变为m. 1555A＞G均质突变、m. 1503G＞A均质突变、m. 1555A＞G异质突变等。听力筛查未通过新生儿中突变率较高突变类型有GJB2基因c. 235delC纯合突变、SLC26A4基因c. 1226G＞A纯合突变；其次为SLC26A4基因c. 2168A＞G杂合突变。结论 无锡市区新生儿致聋基因突变以GJB2基因突变为常见，其次为SLC26A4基因、GJB3基因、线粒体12S rRNA基因；致聋基因突变类型主要为杂合突变；突变频率最高的致聋基因位点为GJB2基因c. 235delC、SLC26A4基因c. 919-2A＞G及GJB2基因c. 299＿300delAT位点；听力筛查未通过新生儿的常见致聋基因突变类型为GJB2基因c. 235delC纯合突变、SLC26A4基因c. 1226G＞A纯合突变和c. 2168A＞G杂合突变。