论文部分内容阅读
目的 探讨调节AMP-活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)对PCl2细胞氧葡萄糖剥夺复氧(oxygen glucose deprivation and reoxygenation,OGD/R)后高迁移率族蛋白l(high mobility group box l,HMGB1)释放及其介导的BV2细胞炎性反应的影响.方法 分别培养PCl2和BV2细胞,应用PCl2细胞建立氧葡萄糖剥夺12 h复氧24 h模型,分别给予5-氨基-4-甲酰胺咪唑核糖核苷酸(5-aminoimidazole-4-c arboxamide,AICAR)5、50和100 μmol/L以及Compound C 0.1、l和10 μmol/L激活或抑制AMPK磷酸化后,应用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测PC12细胞活性,酶联免疫吸附法检测PC12细胞培养基中HMGB1释放水平.将各组OGD/R后PC12培养基分别作用于BV2细胞正常培养24 h.分别采用免疫印迹法和酶联免疫吸附法检测BV2细胞中NF-κB抑制蛋白(inh~itor of NF-κB,IκB)磷酸化水平和TNF-α释放水平.结果 OGD/R后,PC12细胞活性显著降低[(68.84 ±6.60)％对(100.04±8.82)％;P＜0.01],AMPK磷酸化水平显著增高(1.95±0.39对1.00±0.20;P＜0.05),细胞外HMGB1释放显著增多[(287.66±26.42) pg/μl对(53.05±9.11) pg/μl;P ＜0.01].与OGD/R组比较,AICAR 100 μmol/L能显著增高OGD/R后PC12细胞存活率[(78.60±3.75)％对(68.84±6.60)％;P＜0.05]、促进AMPK磷酸化(3.32±0.66对1.95 ±0.39;P＜ 0.01)和减少细胞外HMGB1的释放[(164.06±12.77) pg/μl对(287.66±26.42) pg/μl;P＜0.01].相比之下,Compound C 10 μmol/L则会显著降低PC12细胞存活率[(40.44±3.79)％对(68.84±6.60)％;P＜0.01]、抑制AMPK磷酸化(1.07±0.21对1.95±0.39;P＜0.05)和增加HMGB1的释放[(337.97±18.90) pg/μl对(287.66±26.42) pg/μl;P＜0.01].AICAR 100 μmol/L组条件培养基能显著抑制BV2细胞的IκB磷酸化(1.68±0.51对3.09±0.10;P＜0.05)和减少TNF-α释放[(669.53±38.58) pg/μl对(841.76±45.82) pg/μ1;P＜0.05];Compound C 10 μmol/L组条件培养基则能显著促进BV2细胞IκB磷酸化(4.98±1.24对3.09 ±0.10;P ＜0.01)和增加TNF-α释放[(1 035.32±128.06) pg/μl对(841.76±45.82) pg/μl;P＜0.05].结论 促进AMPK磷酸化激活能减少PC12细胞OGD/R后HMGB1的释放、抑制其介导的BV2细胞NF-κB炎症通路激活并且减少TNF-α释放,从而减轻神经炎性损伤;相反,抑制AMPK磷酸化则会促进PC12细胞OGD/R后HMGB1释放和加重其介导的BV2细胞炎性反应.