【摘 要】
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目的 构建人SH3GL2基因的重组真核表达质粒,并转染至人脑微血管内皮细胞,检测对内皮细胞体外成管能力的影响.方法 提取人脑微血管内皮细胞的总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增人SH3GL2基因的蛋白编码区(CDS),亚克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP.测序正确后,将重组质粒转染至人脑微血管内皮细胞,采用matrigel三维血管生成实验检测对内皮细胞成管能力变化.结果 人SH3GL2基因克隆至表达载体pIRES2-EGFP,重组质粒双酶切鉴定后,琼脂糖凝胶电泳验证片段大小为1058b
【机 构】
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中国医科大学 附属第一医院干诊神经内科,沈阳,110001;中国医科大学 基础医学院神经生物学教研室,沈阳,110001;中国医科大学 附属第一医院神经内科,沈阳,110001
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目的 构建人SH3GL2基因的重组真核表达质粒,并转染至人脑微血管内皮细胞,检测对内皮细胞体外成管能力的影响.方法 提取人脑微血管内皮细胞的总RNA,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增人SH3GL2基因的蛋白编码区(CDS),亚克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP.测序正确后,将重组质粒转染至人脑微血管内皮细胞,采用matrigel三维血管生成实验检测对内皮细胞成管能力变化.结果 人SH3GL2基因克隆至表达载体pIRES2-EGFP,重组质粒双酶切鉴定后,琼脂糖凝胶电泳验证片段大小为1058bp.将重组质粒转染人脑微血管内皮细胞,和对照组相比,pIRES2-EGFP-SH3GL2转染组内皮细胞成管能力显著降低(P＜0.05).结论 成功构建人SH3GL2真核表达载体,人脑微血管内皮细胞过表达SH3GL2能够抑制内皮细胞的成管能力.
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