【摘 要】
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目的 探讨小鼠小肠在缺血再灌注(I/R)条件下,肠上皮细胞(IECs)来源的骨形成蛋白-4(BMP-4)促进肠上皮间淋巴细胞(IELs)凋亡及其机制.方法 (1)分离正常小鼠IELs,采用反转录-聚
【机 构】
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第三军医大学新桥医院普通外科,重庆,400037
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目的 探讨小鼠小肠在缺血再灌注(I/R)条件下,肠上皮细胞(IECs)来源的骨形成蛋白-4(BMP-4)促进肠上皮间淋巴细胞(IELs)凋亡及其机制.方法 (1)分离正常小鼠IELs,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证IELs中是否存在BMP受体及经典信号Smad蛋白分子表达.(2)建立小鼠小肠I/R损伤模型,随机分为手术组(I/R)和假手术组(Sham),苏木素-伊红(HE)染色观察肠黏膜绒毛变化;检测IECs中BMP-4蛋白和IELs中BMP受体及Smad磷酸化蛋白变化.(3)分离培养正常小鼠IELs,分别加入外源性BMP-4蛋白及BMP-4拮抗剂NOGGIN蛋白刺激,观察BMP-4对IELs中p-Smad 1/5表达变化和IELs凋亡的影响.结果 正常IELs中存在BMP受体[骨形成蛋白IA受体(BMPRIA)、骨形成蛋白IB受体(BMPRIB)]及N-Smad(Smad1、Smad5、Smad8)蛋白的表达,I/R组肠黏膜损伤与IECs中BMP-4表达较Sham组明显增加;在I/R刺激下,IELs中BMP受体和磷酸化Smad1/5(p-Smad1/5)均较Sham组表达增加[BMPRIA:(12.66±4.89)％,BMPRIB:(16.70±5.06)％,p-Smad1/5:(44.10±10.10)％,P＜0.05];体外培养实验发现:IELs单独培养给予BMP-4刺激后p-Smad较空白对照组增加[(29.10±9.09)％,P＜0.05]和IELs的凋亡率较空白对照组增加[(20.30±5.43)％,P＜0.05],NOGGIN可拮抗BMP-4诱导的Smad磷酸化和IELs凋亡率的增加.结论 小肠在I/R条件下,肠上皮细胞中BMP-4蛋白分泌表达增加,通过与IELs上的BMP受体结合,进而激活IELs内的Smad信号通路途径促进IELs的凋亡,从而加重肠屏障损伤.
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