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利用发酵罐对表达双功能谷胱甘肽合成酶的重组大肠杆菌和毕赤酵母菌进行发酵工艺优化,确定重组大肠杆菌在25℃,pH6.5,菌体密度OD600为35的诱导条件下,谷胱甘肽合成酶活力可达到75.2 U/mL,比优化前提高了31.3%。通过对重组毕赤酵母的发酵对比实验,确定25℃,pH5.0诱导,溶氧值控制在10%~20%,酶活可提高到133.5 U/mL。经过系统优化后,新型谷胱甘肽合成酶在不同宿主菌中均获得高水平的表达,为工业化生产奠定了基础。