观察硫氧还蛋白还原酶(TrxR)1在燃煤污染型砷中毒病区砷暴露人群和大鼠血液和肝脏中的表达,探讨其在燃煤污染型砷中毒肝损伤中的作用。
方法①人群研究:选择贵州省燃煤污染型砷中毒病区133例砷暴露者作为观察对象,依据临床检查和诊断结果分为病区非病人组(25例)、无明显肝病组(38例)、轻度(43例)和中重度肝病组(27例);以非砷污染村34名健康居民为对照组。采集上述观察对象的外周血,采用实时荧光定量PCR法检测TrxR1 mRNA表达,并用可见分光光度法检测TrxR酶活力。②动物实验:将30只体质量为80~ 100 g的Wistar大鼠,采用随机数字表法按体质量分为对照组、饮水型砷中毒组和低、中、高砷粮食污染组,共5组,每组6只。对照组常规喂养,饮水型砷中毒组饮用含10 mg/kg三氧化二砷(As2O3)的水溶液,低、中、高砷粮食污染组喂饲用病区高砷煤烘烤的玉米粉所配制的饲料(含砷量分别为25、50、100 mg/kg),均喂养3个月。采用实时荧光定量PCR法检测其外周血和肝组织中TrxR1 mRNA表达,免疫组织化学法检测肝组织TrxR1蛋白表达,可见分光光度法检测血清和肝组织中TrxR酶活力。
结果①人群研究结果:病区非病人组、无明显肝病组、轻度和中重度肝病组外周血TrxR1 mRNA表达[中位数(四分位数)]分别为1.599 8 (1.128 9~ 2.156 8)、1.469 3(1.146 1~ 1.976 3)、1.203 6(0.463 1~ 1.816 2)和0.912 3(0.631 8~ 1.535 0),轻度和中重度肝病组均低于对照组[1.649 7 (1.161 1~ 2.380 2),P均< 0.05];血清TrxR酶活力分别为(3.12±0.76)、(2.81±0.84)、(2.52±0.73)、(2.42±0.76) kU/L,轻度和中重度肝病组均低于对照组[(3.02±0.70) kU/L,P均< 0.05]。②动物实验结果:大鼠饮水型砷中毒组和低、中、高砷粮食污染组外周血TrxR1 mRNA表达分别为1.05±0.14、1.18±0.18、1.04±0.10、0.97±0.13,除低砷粮食污染组外,其余各染砷组均低于对照组(1.23±0.15,P均< 0.05);肝组织TrxR1 mRNA表达分别为0.78 ± 0.10、0.83±0.10、0.79±0.09、0.77±0.11,除低砷粮食污染组外,其余各染砷组均低于对照组(0.94±0.12,P均< 0.05);肝组织TrxR1蛋白表达量分别为310.33±38.81、312.50±23.36、305.67 ± 20.57、298.17 ± 23.52,各染砷组均低于对照组(348.50±32.35,P均< 0.05);血清TrxR酶活力分别为(4.22±0.73)、(4.86±0.63)、(4.04±0.57)、(3.73±0.64)kU/L,各染砷组均低于对照组[(9.52±1.08)kU/L,P均< 0.05];肝组织TrxR酶活力分别为(14.82±1.67)、(18.76±2.76)、(14.90±2.17)、(11.55±1.74)U/mg,均低于对照组[(23.71 ± 3.05)U/mg,P均< 0.05]。
结论砷通过下调TrxR1转录表达和蛋白表达,降低其酶活力,加重燃煤污染型砷中毒肝损伤的发生发展。