背景:目前多采用酶解法分离成年大鼠心肌细胞,但在灌流装置、灌流液体和灌流方法等方面的差异较大,且多以单个细胞的急性分离为目的,仅适于进行电生理研究。目的:建立稳定的改良成年SD大鼠心肌细胞分离方法,使之适于进行原代培养和研究。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2008-03/09在华中科技大学同济医学院附属同济医院分子心脏病中心完成。材料:8～10周龄雄性SD大鼠30只,由同济医学院实验动物中心提供,Ⅱ型胶原酶、蛋白酶和不含脂肪酸的牛血清白蛋白分别为美国Worthington公司、美国Sigma公司和德国Merck公司产品。方法:SD大鼠麻醉后,快速取出心脏,采用改良的Langendorff灌流装置行主动脉逆行灌注,无钙Krebs-Henseleit缓冲液(KH液)非循环灌流4min,0.6g/LWorthington2型胶原酶联合0.03g/L蛋白酶消化约15min,剪下心室组织于消化液和10g/L牛血清白蛋白的混合液中,剪碎后于37℃振摇孵育10min,200μm尼龙网过滤,500g离心1min,梯度复钙,自然沉降。主要观察指标:心肌细胞的形态、活力和产量。结果:复钙后的杆状存活心肌细胞得率为(73±5.6)%(n=30),其中90%以上的杆状心肌无明显搏动,横纹清晰。每只大鼠心脏的平均存活心肌细胞产量为(4.2±0.4)×106。结论:经过改良的Langendorff逆行主动脉灌流酶解法分离成年大鼠心肌细胞,可稳定获得高比例的存活心肌细胞并用于原代培养和细胞/分子生物学研究。